随着组织工程皮肤在皮肤及系统性疾病临床应用(烧伤治疗和基因疗法)上的不断发展,种子细胞的选择成为一个关键因素。皮肤组织工程的研究显示表皮干细胞较其他多能干细胞有更大的优势,因此如何快速分选表皮干细胞也就成为一个热门的课题,本实验通过不同时间内角质形成细胞对IV型胶原的粘附特性不同,对其进行分时分选,并对分选后的细胞进行生物学特性的研究,为表皮干细胞的分选提供实验依据。将分离后人包皮的角质形成细胞接种到预先铺有I和IV型胶原的六孔板中,在370C、CO2孵箱中分别孵育10、20、30、60min后,吸去未粘附细胞,离心法测粘附细胞在上述四个时段粘附在IV型胶原上的粘附力及粘附在I、IV型胶原20min粘附细胞的粘附力。细胞计数器测粘附数及细胞大小,并用β1整合素、外皮蛋白、CK10、CK19对贴壁10min的细胞进行鉴定,流式细胞仪测β1整合素在四时段的阳性表达量,相差显微镜进行细胞形态学观察,并对四时段进行克隆形成率的测定。结果显示:形态上贴壁细胞小而圆,反光能力强,核浆比大。随着时间的延长,贴壁细胞数逐渐增多,20min内粘附细胞数与10min有统计学意义(P<0.05),而与30min、及60min无统计学意义,在30min粘附的细胞最小,克隆形成率20min与30、60min有统计学意义(P<0.05),而与10min无统计学意义,粘附力10min与20、30、60min有统计学意义,20、30分钟之间无统计学意义,I型胶原与IV胶原无差别。整合素β1间接免疫荧光、免疫组化显示贴壁细胞10min后均为阳性,CK19免疫组化显示部分阳性,外皮蛋白阴性表达,CK10偶有阳性,流式细胞仪测四时段整合素β1阳性率表达量均为100%。结论:利用IV型胶原分选后的角质形成细胞具有干细胞的特征,以粘贴20min最为理想,可用于表皮干细胞的生物学特性的研究。