化妆品中性激素高效相色谱检测方法研究

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本论文讨论了①化妆品中5种禁止添加性激素的高效液相色谱同测方法。选取了炔诺孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮、丙酸睾丸酮为研究对象,针对水、膏霜、凝胶及精油开发了两种前处理条件,填补了5种性激素的同测空白。②对2007《化妆品卫生规范》中涉及的孕酮、睾丸酮、甲基睾丸酮、雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚7种性激素的高效液相色谱同测方法的色谱条件部分进行了改进,并优化了数据处理方法。试验通过液相色谱仪器条件的研究,对5种性激素同时进行了分离。研究对象包括流动相比例、色谱柱、柱温、流速、进样量、检测波长的选择。最终确定的仪器条件为:色谱柱:Kromasil100-5C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈+水=65+35(v+v);流速:1.OmL/min:进样量:5μL;紫外检测波长:242、290nm;柱温:25℃。5种性激素分离效果良好,在100~10000μg/L范围内呈良好线性关系,相关系数大于0.9990。仪器检出限浓度为18.92-46.78μg/L、定量限浓度为33.1~131.0μg/L,日内、日间精密度RSD(%)值均在4以内,精密度高,稳定性好。在研究对比不同溶剂萃取、添加沉淀剂、固相小柱净化、冷冻离心等前处理步骤的优劣后,确定了膏霜、乳液、凝胶样品化妆品中5种性激素的前处理方法。采用甲醇提取,固体无机盐破乳,涡旋超声离心后过滤进样。5种性激素在化妆品中的方法检出限为0.552~1.008mg/Kg,方法定量限1.104~5.040mg/Kg;实际样品中加标回收率为97-123%,RSD(%)值<3%。方法操作简便,定值准确,能够满足多种化妆品中5种性激素的检测要求。在前人研究的基础上改进了油基精油样品的前处理方法,精油样品采用正己烷溶液加标,90%甲醇-水(v+v)溶液提取,正己烷除脂。5种性激素方法检出限为0.552~5.040mg/Kg,方法定量限为0.662~5.260mg/Kg;除丙酸睾丸酮外,实际样品中加标回收率为80-122%,RSD(%)值<3%。方法操作简便,定值准确,能够满足精油中5种性激素的检测要求。研究最后改进了《化妆品卫生规范》中涉及的孕酮、睾丸酮、甲基睾丸酮、雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚7种性激素的高效液相色谱同测方法中的色谱条件部分。得到2种能使7种性激素同时基线分离的流动相比例,并且重现性良好。在此基础上分析研究了流动相比例改变对7种激素色谱行为影响,对后续测定建立了一种曲线拟合的数据处理方法。
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