大气压低温等离子体通过JNK/STAT3/MMp9信号通路抑制CAL27细胞迁移及上皮间质转化的研究

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目的:大气压低温等离子体技术具有高效能,低耗能,无污染,接近正常温度的环境和不需要复杂的真空系统的多种优势,它目前应用于消毒灭菌,材料表面改性,薄膜沉积,环境净化和食品安全等多种领域。近年来在医学领域上掀起了巨浪。大气压等离子体(CAP)是由正负带电的粒子和多种中性粒子组成的电中性的电离气体,CAP同时也参与某些恶性肿瘤的转变,为临床治疗恶性肿瘤带来了新的曙光。舌癌是一种好发于男性舌前三分之二的容易发生淋巴转移的头颈部恶性肿瘤。本论文旨在研究低温等离子体对舌癌细胞的增殖,迁移和侵袭的影响,为临床治疗舌癌提供新的技术支持和理论依据。方法:应用CAP分别处理舌癌CAL27细胞0s、15s、30s、60s,在倒置显微镜下观察不同刺激时间下舌癌细胞的形态;在不同处理条件下装载DCFH-DA探针,使用荧光显微镜下观察细胞内活性氧ROS含量的变化;采用CCK-8技术的方法计算细胞增殖能力;采用细胞划痕实验及Transwell方法检测舌癌细胞的迁移能力;Western blot法测定舌癌细胞的迁移相关蛋白的表达。应用单因素方差分析的方法计算数据,利用SPSS统计学软件进行数据的统计学分析。结果:1、观察发现倒置显微镜下,CAP的处理可以使细胞体积变小,形态变圆,当处理时长达到60s时,部分贴壁细胞与基底膜附着能力降低,呈团状漂浮。2、荧光显微镜观察显示随着刺激时间的增加,舌癌细胞内ROS含量出现了上升的趋势,说明CAP的刺激可提高细胞内ROS含量在一定的时间里。3、CCK-8实验结果表明,CAP刺激细胞会使舌癌细胞的增殖能力受到明显的变化(P<0.001),并且这种变化的作用与刺激时间相关。4、细胞划痕技术与Transwell实验结果提示,CAP刺激的时间在一定程度上抑制舌癌细胞的迁移能力。(P<0.05)。5、Western blot方法检测结果表明,E-cadherin含量增加,stat3,JNK,N-cadherin,MMP9含量降低。说明CAP可抑制舌癌细胞迁移(P<0.05),当刺激剂量为60s时,对迁移相关的蛋白(EMT)出现明显的变化(P<0.05)。结论:大气压等离子体CAP能提高舌癌细胞内ROS含量的提升,大气压等离子体对舌癌细胞的迁移在一定程度上表现为抑制作用。同时在一定程度是抑制肿瘤细胞的增殖。
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