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目的 初步探讨核转录因子-κB(NF-κB)/一氧化氮(NO)通路在大鼠肝纤维化形成过程中所起的作用,同时对褪黑素(MT)保护四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝损伤的时效关系及其保护机制进行初步研究。 方法 将99只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)对照组和MT给药组。用CCl4制造大鼠慢性肝损伤模型,同时予MT(5mg·kg-1)、NAC(100mg·kg-1)腹腔注射。在造模的第1、2、3月末处死大鼠,分别测定大鼠体重、肝脏湿重和血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和白蛋白水平及白球比值的变化;分别采用高效液相色谱法和Griess法检测大鼠血清和肝脏匀浆中NO的含量,并作肝脏炎症和纤维化指数评分,同时用免疫组化法观察肝脏NF-κB亚单位P65、P50及iNOS、α-SMA的表达。 结果 模型组大鼠血清ALT、AST水平和肝脏病理学评分显著高于正常对照大鼠,NF-κB P65、NF-κB P50、α-SMA表达明显强于正常组(P<0.01)。在第1月末,肝脏枯否氏细胞(KC)中强烈表达NF-κB,第3月末则在肝星状细胞(HSC)中强烈表达。相关分析表明,大鼠肝脏α-SMA在第3月末的表达与NF-κB P50、P65呈显著正相关(r=0.884,p=0.08;r=0.73,p=0.062)。用NAC抑制肝脏NF-κB激活,大鼠肝功能、肝脏病理损伤显著改善,肝脏α-SMA表达也随之降低。 MT明显抑制了肝脏NF-κB P65、NF-κB P50的表达,降低转氨酶水平,提高白蛋白含量和白球比值,肝脏α-SMA的表达也显著下降。同时,肝脏病理损伤征象得到改善,在第1月末以改善肝脏炎症为主,在第2、3月末以改善肝脏纤维化为主。 同期实验结果亦表明,模型组大鼠肝脏表达iNOS显著强于正常对照组,血清和肝脏匀浆中NO含量也明显增高,且在各时间点上iNOS的表达与肝脏匀浆中NO安徽医科大学硕士学位论文含量均呈显著正相关(r=0.875,P=0.023;r=0.865,P=0.026:二0.752,P=0.08)。MT和NAC在抑制NF一妞激活的同时,可使肝脏iNOS表达减少,显著降低了肝脏匀浆中NO含量,但血清中NO含量无显著下降。结论(1)在肝纤维化形成过程的早期炎症阶段,NF一出主要调节KC释放炎症介质,具有重要的促炎作用;在纤维化阶段,则NF一沼主要调控HSC的活性,具有促纤维化作用。(2)在CC14诱导的大鼠慢性肝损伤早期,MT可以抑制枯否氏细胞的NF一沼激活,减少炎性细胞因子的表达,发挥抗炎作用,在慢性肝损伤中晚期,MT抑制HSC中NF一妞激活,抑制了其表型转变,起着减轻或延迟肝纤维化的作用。 (3)由iNOS催化产生NO的过程受NF一沼调控,主要参与肝脏炎症反应;MT抑制NF一已激活,减少了肝脏iNOS的表达,N0生成受抑制,改善了肝脏炎症反应。