miR-21对宫颈癌HeLa细胞生物学特性的影响

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目的:研究miR-21对HeLa细胞的增殖、迁移及侵袭能力等生物学特性的影响,为宫颈癌的基因治疗及预后评估提供实验基础。方法:将宫颈癌HeLa细胞分为miR-21上调组、miR-21下调组、各自阴性对照组及空白对照组。利用脂质体(LipofectamineTM 2000)介导法,miR-21上调组细胞转染Pre-miRTM miR-21 Precursor Molecule,miR-21下调组细胞转染Anti-miRTM miR-21 Inhibitor(anti-miR-21 oligonucleotides,AMOs) ,阴性对照组细胞分别转染miRNA前体阴性对照及miRNA抑制剂阴性对照,空白对照组未转染任何miRNA分子。实时荧光定量PCR技术检测转染后各组细胞中miR-21的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染后各组细胞的增殖能力,细胞划痕实验检测转染后各组细胞的迁移能力,Transwell小室法检测转染后各组细胞的侵袭能力。结果:1、实时荧光定量PCR实验结果显示:miR-21前体作用HeLa细胞后,miR-21上调组与对照组相比目的基因miR-21的表达水平明显上调(P<0.01);miR-21抑制剂作用细胞后,miR-21下调组与对照组相比目的基因miR-21的表达水平明显下调(P<0.01)。2、MTT增殖实验结果显示:转染miR-21前体48h后,与对照组相比HeLa细胞的相对增殖活性增高了15%-17%(P<0.05);转染miR-21抑制剂48h后,与对照组相比HeLa细胞的相对增殖活性降低了13%-20%(P<0.05)。3、细胞划痕实验结果显示,转染miR-21前体48-72h后,穿越划痕区的细胞数与对照组相比明显增多,细胞迁移能力较强;转染miR-21抑制剂48-72h后,穿越划痕区的细胞数与对照组相比减少,提示细胞迁移能力较弱。4、Transwell侵袭实验结果显示:miR-21上调组穿膜细胞数为216±24;miR-21下调组穿膜细胞数为53±6;miRNA前体阴性对照组穿膜细胞数为122±15;miRNA抑制剂阴性对照组穿膜细胞数为115±10;正常对照组穿膜细胞数为115±14。miR-21上调组与对照组比较,穿膜细胞数明显增多,差异具有显著性(P<0.01),而miR-21下调组与对照组比较,穿膜细胞数明显减少,差异具有显著性(P<0.01)。结论:1、miR-21前体能够有效上调miR-21在HeLa细胞中的表达水平,而miR-21抑制剂能够有效下调miR-21在HeLa细胞中的表达水平。2、上调miR-21在HeLa细胞中的表达可以促进细胞的增殖活性,对细胞的迁移,侵袭能力有明显的增强作用;下调miR-21在HeLa细胞中的表达则抑制细胞的增殖,同时减弱细胞的迁移及侵袭能力。3、miR-21与宫颈癌的发生发展密切相关。
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