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目的:本实验为研究人视网膜Müller胶质细胞对视网膜微血管内皮细胞紧密连接程度影响,将人的视网膜微血管内皮细胞和人视网膜Müller胶质细胞共同培养,通过电镜观察及跨内皮细胞电阻测定来研究Müller胶质细胞对视网膜微血管内皮细胞紧密连接程度的影响。 方法:⑴原代培养人视网膜微血管内皮细胞(RMEC),并对其生长特征和免疫学特征进行鉴定;⑵原代培养人视网膜Müller胶质细胞(RMGC),并对其免疫学特征进行鉴别;⑶将RMEC和RMGC分别按一定浓度接种于Transwell小室膜的两侧进行共同培养,RMGC接种于小室膜底部外侧(1*104/cm2).2h后RMEC接种于小室内底部。每日观察细胞生长情况,进行电镜扫描,观察紧密连接程度;⑷采用跨内皮电阻测定来评价细胞间紧密连接程度的变化情况。 结果:①视网膜Müller胶质细胞电阻值一直保持很低的数值,波动在-5.7-15(Ω·cm2)。②随着视网膜微血管内皮细胞数量的不断增加,阻值呈现上升趋势,RMEC层的跨内皮细胞电阻值在第八天时达到最高,为86.3±7.9(Ω·cm2),随后阻值开始出现迅速下降趋势,说明培养到第八天后细胞活力开始减弱。③视网膜微血管内皮细胞和视网膜Müller胶质细胞共同培养组在培养的第四天阻值就开始出现上升趋势,第六到八天上升速度最快,在有RMGC存在的共培养组,电阻值在第七天时为97.6±3.6(Ω·cm2)。约为单独培养RMEC组在第七天时的2倍,第八天达到最高值113.5±5.3(Ω·cm2)。RMEC单层和共培养层的电阻最高值分别为86(Ω·cm2)和113(Ω·cm2)。在第六到九天时,共培养组和RMEC单层的电阻值差异有统计学意义(p<0.05)。此时细胞间紧密连接发育成熟,可用于进一步的通透性实验。 结论:共同培养人视网膜微血管内皮细胞和人视网膜Müller胶质细胞可以体外建立简单的视网膜内屏障;视网膜Müller胶质细胞可以促进视网膜微血管内皮细胞间紧密连接的形成。