论文部分内容阅读
本课题以内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室从传统发酵酸马奶中分离鉴定的240株乳杆菌中,经前期大量实验确立的一株具有明显益生特性的乳杆菌Lactobacillus. casei Zhang(Lb. casei Zhang)为研究对象,观察了其对实验小鼠的的免疫调节及抗肿瘤作用,并探讨了其可能的作用机理。前期的大量研究表明,益生菌Lb. casei Zhang具有优良的益生特性和降胆固醇、抗氧化和免疫调节等对机体有益的功能特性。本课题以前期的研究为基础,深入探讨了益生菌Lb. casei Zhang免疫调节及抗肿瘤方面的功能特性,为其进一步开发应用提供了实验依据。本课题实验分四部分:第一部分:采用动物活体试验方法,Lb. casei Zhang制备成热致死菌体和活菌制剂各分成高、中、低三个剂量组灌服小鼠15天,测定胸腺指数、脾脏指数;观察ConA促进脾淋巴细胞增殖作用、脾脏巨噬细胞吞噬中性红的能力。采用ELISA法检测血清中IFN-γ、IL-12、IL-1α、TNF-α的含量。第二部分: Lb. casei Zhang活菌制剂分高、中、低三个剂量组灌服小鼠。分别于第3、7、11、15天,摘取脾脏,计算脾指数;RT-PCR法测定脾脏中IL-2和IL-2RαmRNA的转录水平,并从小鼠局部肠粘膜免疫组织及免疫细胞着手,对服用Lb. casei Zhang后小鼠肠道局部免疫组织一Peyer’s结的数量计分进行了研究。采用免疫组化法检测小肠粘膜CD3+、IgA+细胞数量并通过图象分析软件分析其阳性信号平均光密度值了解其表达情况。第三部分:以荷H22肝癌小鼠为模型,用Lb. casei Zhang活菌制剂分高、中、低三个剂量灌服小鼠12天后,滴片法测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数;计算脾指数,计算肿瘤生长抑制率,ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子-β(TNF-β)的含量;免疫组化法检测小鼠肿瘤细胞中癌基因Bcl-2和抑癌基因Bax蛋白的表达程度,从分子水平探讨其抗肿瘤的可能机制。第四部分:以荷H22肝癌化疗小鼠为模型,观察Lb. casei Zhang对化疗药物的减毒增效作用。以腹腔注射环磷酰胺(CTX)联用Lb. casei Zhang活菌制剂高、中、低三个剂量灌服小鼠12天后,计算脾指数、肿瘤生长抑制率,并对小鼠肠道局部免疫组织一Peyer’s结进行计数计分;采用原位杂交法检测肿瘤细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,采用碘化丙啶(PI)染色利用流式细胞仪检测肿瘤细胞细胞周期及凋亡率。通过以上的实验结果,我们得出的总体结论是:具有明显益生特性的乳杆菌Lb. casei Zhang对实验小鼠的细胞免疫、体液免疫、肠道粘膜免疫可产生多方面的、有利于机体免疫功能状态的调节作用;对体外移植性小鼠肝癌H22肿瘤具有明显的抑制生长作用,对化疗药环磷酰胺(CTX)具有明显的减毒增效作用,其抗肿瘤的机制可能是通过增强荷瘤小鼠的免疫功能、抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡而发挥作用。