论文部分内容阅读
蓖麻毒蛋白(Ricin)是从大戟科(Euphorbiaceae)植物蓖麻(Ricinus communis L.)中分离纯化的一种植物糖蛋白,是一种核糖体失活蛋白(Ribosome-inactivating Protein,RIP),具有RNA N-糖苷酶活性,对动物细胞特别是某些肿瘤细胞具有显著的杀伤作用。蓖麻毒蛋白在抗肿瘤、抗艾滋病和生物农药等方面具有较高的研究价值,是当今国际上的研究热点。本文从蓖麻毒蛋白的分离纯化、蓖麻毒蛋白作为种子储藏蛋白的研究、蓖麻毒蛋白热稳定性的研究及其抗癌活性四个方面进行了研究,主要研究内容和结果如下:(一)蓖麻毒蛋白的分离纯化:本研究以蓖麻籽为实验材料,采用水相抽提获取总蛋白,通过丙酮沉淀的方法进行蛋白质的分离和浓缩,经透析获得蓖麻毒蛋白的粗品。再利用亲和层析技术来实现蓖麻毒蛋白的纯化。经SDS-PAGE电泳分析所得蛋白质为纯品,后经肿瘤细胞杀伤实验验证所得蛋白即为蓖麻毒蛋白。本实验的创新之处在于采用了丙酮这种蛋白质变性剂进行处理,既实现了蛋白质的分离和浓缩,又很好地萃取了蓖麻油,避免了蓖麻油对实验操作的影响。(二)蓖麻毒蛋白作为种子储藏蛋白的研究:利用SDS-PAGE电泳技术分析了蓖麻种子在成熟和萌发的过程中蓖麻毒蛋白的含量变化。实验结果显示,在种子的成熟和萌发阶段,蓖麻毒蛋白的含量和在总蛋白中所占的比重,呈现出明显地增加和减少,即蓖麻毒蛋白表现出的行为是积累和消耗的过程,由此证明蓖麻毒蛋白是以储藏蛋白的形式存在于蓖麻种子中的。(三)蓖麻毒蛋白的热稳定性的研究:采用Mg2+、SDS、EDTA三种试剂,并以水为对照,对蓖麻毒蛋白粗品进行保温处理,通过SDS-PAGE电泳技术分析蓖麻毒蛋白的降解情况。实验发现蓖麻毒蛋白是一种热稳定性非常好的蛋白质。这一结果为蓖麻毒蛋白作为抗肿瘤药物的开发提供了强有力的支持。(四)蓖麻毒蛋白抗癌活性的探究:本实验研究了蓖麻毒蛋白对肝癌细胞和食管癌细胞的杀伤作用。实验结果显示,蓖麻毒蛋白对两种癌细胞均表现出明显的杀伤作用,蓖麻毒蛋白是一种广谱的抗癌药物。