论文部分内容阅读
目的:通过查阅收集对骆驼胎盘研究发现,目前国内外对骆驼胎盘化学成分及药效学研究不够成熟且不多,因此本项研究对阿拉善双峰驼胎盘干粉进行质量评价并初步探索驼胎盘干粉降糖作用机理,阐释天然药物骆驼胎盘干粉的降低血糖作用机理。验证民间用骆驼胎盘通过降血糖治疗糖尿病。将填补双峰驼胎盘干粉质量评价及降糖作用机理研究的空白。方法:依据《中国药典》(2020版),对阿拉善双峰驼胎盘干粉进行理化鉴别(蛋白质类成分和氨基酸鉴别),一般检查(水分、灰分及浸出物含量),薄层鉴别(氨基酸成分鉴别),主成分含量测定(蛋白质,微量元素及氨基酸含量),聚合酶链式反应鉴别等进行质量评价。采用高脂高糖饲料合并腹腔注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液溶解的链脲佐菌素(STZ)建立大鼠高血糖模型,以盐酸二甲双胍片为阳性对照,从整体动物、细胞、分子、基因等水平,采用传统药理学与现代分子生物学相结合的实验方法,检测空腹血糖,血清中糖化血红蛋白(GHbALc)、胰岛素(INS)、葡萄糖(GLUC3)含量和肾脏中GLUT2、SGLT2的蛋白表达和mRNA的表达研究阿拉善双峰驼胎盘干粉对高血糖大鼠降糖的作用机理。结果:(1)理化鉴别结果发现此药材含有氨基酸成分和蛋白质类成分。阿拉善双峰驼胎盘干粉水分含量为0.05%～0.08%,灰分含量14.9%～15.0%,酸不溶性灰分含量8.8%～9.0%,水溶性浸出物含量4.06%～5.65%,醇溶性浸出物含量2.65%～3.22%。阿拉善双峰驼胎盘干粉重金属铅(Pb)含量为0.0588mg/kg,汞(Hg)含量为 1.41mg/kg,铬(Cr)含量为 57.28mg/kg,镉(Cd)含量为 0.0002mg/kg,砷盐(As)含量为0.96mg/kg。阿拉善双峰驼胎盘干粉TLC鉴别70%乙醇煎煮法提取,正丁醇:冰乙酸:水(5:1.5:1.5)展开,0.2%茚三酮乙醇显色,105℃烘干3～5min分离出盐酸赖氨酸、脯氨酸、苏氨酸、酪氨酸及丙氨酸等五种氨基酸成分的显色斑点清晰,分离度高。阿拉善双峰驼胎盘干粉蛋白质含量为15.05%～19.18%;微量元素里钾元素(K)含量为0.6546%,钙元素(Ca)含量为0.7672%,钠元素(Na)含量为2.586%,镁元素(Mg)含量为0.3012%,铜元素(Cu)含量为0.0005%,铁元素(Fe)含量为0.4444%,锰元素(Mn)含量为0.0060%,锌元素(Zn)含量为0.0055%;18种氨基酸里天门冬氨酸(ASP)含量为5.155%,苏氨酸(THR)含量为2.297%,丝氨酸(SER)含量为2.625%,谷氨酸(GLU)含量为6.676%,甘氨酸(GLY)含量为6.815%,丙氨酸(ALA)含量为4.025%,胱氨酸(CYS)含量为0.883%,缬氨酸(VAL)含量为3.095%,蛋氨酸(MET)含量为0.868%,异亮氨酸(ILE)含量为1.471%,亮氨酸(LEU)含量为4.611%,酪氨酸(TYR)含量为1.817%,苯丙氨酸(PHE)含量为2.597%,赖氨酸(LYS)含量为3.653%,组氨酸(HIS)含量为1.763%,精氨酸(ARG)含量为3.990%,脯氨酸(PRO)含量为4.171%,色氨酸(TRP)含量为0.652%。阿拉善双峰驼胎盘干粉聚合酶链式反应鉴别结果证明此药材是骆驼胎盘。(2)阿拉善双峰驼胎盘干粉对高血糖大鼠降糖的作用机理研究,参照糖尿病高血糖大鼠模型制备方法及预实验,用高脂高糖饲结合STZ造模法,造模后除正常组外其它组大鼠都出现了无精打采、多饮、多尿、毛发发黄等表现,测量3d,7d空腹血糖变化后发现造模3d后的血糖值为≥17.88mmol/L,造模7d后血糖值为≥17.49mmol/L,与正常组对比模型组老鼠血糖值上升(p<0.01),造模后出现多饮、多吃、多尿及体重下降《三多一少》特征。阿拉善双峰驼胎盘干粉对高血糖大鼠体重、肝脏重量、肾脏重量及胰腺重量均无明显变化,对空腹血糖有降低作用。阿拉善双峰驼胎盘干粉对高血糖大鼠血清中GHbALc含量有明显的降低作用、血清中INS含量没有明显的变化、血清中GLUC3有明显的降低作用。阿拉善双峰驼胎盘干粉对高血糖大鼠肾脏GLUT2和SGLT2蛋白GLUT2和SGLT2 mRNA水平具有下调作用。结论:阿拉善双峰驼胎盘干粉质量研究结果发现该实验方法结果准确,稳定性好,方法可靠及齐全,可作为骆驼胎盘的实验参考依据。阿拉善双峰驼胎盘干粉降糖作用机理研究结果发现对STZ结合高脂高糖饲料结合引起的高血糖大鼠血清中空腹血糖、GHbALc和GLUC3含量具有有明显的降低作用。