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油菜是一种多用途的经济作物,它不仅能够满足人们日益增长的食用油需求,还能够对缓解能源危机发挥十分重要的作用。近三十年来,我国杂交油菜的育种进程愈来愈快,品种数量急剧增加,但是品种的遗传基础大都相对狭窄。DNA分子标记的出现和快速发展,为油菜品种的准确鉴定提供了一种新的技术手段。
本研究利用SSR标记对2007-2008年、2008-2009年以及2009-2010年三年的国家区域试验参试品种进行指纹分析,主要结果如下:
1.本研究利用74对EST序列发展的SSR标记,以及王同华(2007),杨军(2009)筛选出的,共148对SSR引物,从中筛选出21对扩增清新,稳定重复的核心引物,并对这21对引物的PCR反应体系及反应条件进行优化,发现退火温度和引物浓度对扩增效果影响较大,这21对引物的正、反向引物浓度在0.15-0.4umol/L的范围内变化,退火温度在55℃-61℃的范围内浮动。用多态性较为丰富的SSR引物在2个不同的扩增体系中进行PCR扩增,然后分别在3％琼脂糖凝胶和6％聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳从而对两者的扩增结果的影响进行了比较和分析,结果3％琼脂糖凝胶电泳的分辩率低,因此不能替代6％聚丙烯酰胺凝胶电泳进行指纹分析。
2.利用筛选得到的引物,以及优化的PCR反应体系和反应条件对2007-2008年份的106份材料,2008-2009年份的164份材料,以及2009-2010年份的168份材料分别进行指纹分析,得到了这样一个规律:遗传距离相近的品种往往来源于相同的育种单位,如在2009-2010年的研究中,阳光198和阳光2009都来自阳光时代种业公司;C922和C868都来自湖南作物研究所。而在2009-2010年度的国家区域试验参试品种中有2份秦优7号,并且在聚类结果中,这两份材料完全重叠。将每年的聚类结果划区分析,在遗传距离和品种来源之间没有找到明确的关系。
本研究利用SSR标记对2007-2008年、2008-2009年以及2009-2010年三年的国家区域试验参试品种进行指纹分析,主要结果如下:
1.本研究利用74对EST序列发展的SSR标记,以及王同华(2007),杨军(2009)筛选出的,共148对SSR引物,从中筛选出21对扩增清新,稳定重复的核心引物,并对这21对引物的PCR反应体系及反应条件进行优化,发现退火温度和引物浓度对扩增效果影响较大,这21对引物的正、反向引物浓度在0.15-0.4umol/L的范围内变化,退火温度在55℃-61℃的范围内浮动。用多态性较为丰富的SSR引物在2个不同的扩增体系中进行PCR扩增,然后分别在3％琼脂糖凝胶和6％聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳从而对两者的扩增结果的影响进行了比较和分析,结果3％琼脂糖凝胶电泳的分辩率低,因此不能替代6％聚丙烯酰胺凝胶电泳进行指纹分析。
2.利用筛选得到的引物,以及优化的PCR反应体系和反应条件对2007-2008年份的106份材料,2008-2009年份的164份材料,以及2009-2010年份的168份材料分别进行指纹分析,得到了这样一个规律:遗传距离相近的品种往往来源于相同的育种单位,如在2009-2010年的研究中,阳光198和阳光2009都来自阳光时代种业公司;C922和C868都来自湖南作物研究所。而在2009-2010年度的国家区域试验参试品种中有2份秦优7号,并且在聚类结果中,这两份材料完全重叠。将每年的聚类结果划区分析,在遗传距离和品种来源之间没有找到明确的关系。