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肿瘤往往是由于多种细胞基因突变引起的，因而其治疗常涉及多种外源基因的转运。虽然人们已经认识到多基因策略要远比单基因策略有效得多，但是目前缺少一种有效的构建多顺反子的工具。在这方面人们已经做了大量的尝试，如在一个载体内利用多个启动子表达多个蛋白，利用一个载体表达融合蛋白，利用内部启动子以及利用核糖体进入位点(IRES)等，然而结果都不是很理想。传统的病毒来源的IRES由于其结构庞大以及其下游基因表达水平底等问题，严重限制了其在多基因治疗中的广泛应用。为更好的实现多基因共表达，本文采用了一种新的构建多顺反子的策略，即自剪切蛋白FMDV 2A。
FMDV 2A是基因治疗中共表达双基因和多基因的最具吸引力的元件。本实验中将一个长的开放读码框，IL-24-2A-TRAL，插到双靶向腺病毒载体AdCN204的E3区，使其在E3区内源性启动子的控制下。AdCN204具有双重靶向性，分别靶向TERT 通路和Rb通路。借助于AdCN204-IL-24-2A-TRAIL 感染多种组织的肿瘤细胞系来研究2A的剪切效率。实验时用Western Blot来检测翻译产物，结果显示该长的开放读码框表达三种产物，即未剪切的融合蛋白前体IL-24-2A-TRAIL，剪切产物IL-24-2A和TRAIL。在近红外扫描仪上对三种产物进一步定量发现大约50﹪～75﹪的产物以剪切形式存在，其中N端产物多于C端产物，两者在不同组织总量的比在6∶1到2∶1，在肝癌细胞中比约为3∶1到2∶1。我们的研究首次表明FMDV 2A在腺病毒中有很高的剪切活性，是一种构建多顺反子载体的有效策略。为进一步我们构建的双顺反子腺病毒载体在实验肝癌中的抗癌效果，我们进行了肝癌细胞体内和体外实验。结果显示AdCN204-IL-24-2A-TRAIL在体外肝细胞中能够引起显著的细胞毒性，而在体内能够有效的抑制肝癌的增长。