第一部分:　　 目的:研究中国造血干细胞捐献者资料库(CMDP)四川分库中四川籍汉族人群HLA-A*02等位基因分布，分析HLA-A和HLA-B、-DRB1的3座位单体型，初步评估HLA型别中低分辨率匹配的供患者等位基因错配的可能，为HLA-A*02患者在四川骨髓库寻找合适的供者提供一定的选择依据。方法:在中华骨髓库四川分库8934名四川汉族造血千细胞志愿者4508份HLA-A*02阳性样本中随机筛选110份，这些样本己经通过序列特异性引物聚合酶链反应((PCR-SSP)或序列特异性探针(PCR-SSO)方法获得了的中低分辨率分型数据，采用聚合酶链式反应测序分型(PCR-SBT)技术对HLA-A*02等位基因进行测序分析:首先通过组特异性引物，扩增出各样本的A*02等位基因序列，进行第2,3,4外显子测序，获得等位基因型别。用扩检验比较四川库汉族与北京、香港、台湾、日本、韩国、以及美国亚太裔人群A*02等位基因分布的差异，并分析各人群等位基因的累积频率分布情况。采用最大似然法计算HLA-A*02、-B和一DRB1的3座位单体型频率。结果共检测到S种A*02等位基因，A*0207(49.59％)是优势等位基因，其余依次是A*020101(25.62％), A*020301(19.01％), A*020601(4.96％), A*0205(0.83％)。同其它6个亚裔人群的相比，四川库汉族人群的HLA-A*02等位基因分布与台湾人群的差异无统计学意义(p=0.183)，而与香港，北京，美国亚太裔，日本，韩国等人群的差异均有统计学意义(p<0.01) oHLA-A*0207-B*46-DRB1*09是四川库汉族人群最常见的单体型。四川人群的HLA-A*02等位基因分布的集中度仅次于日本和韩国，在中国人群中偏高。四川骨髓库库汉族人群HLA-A*02、-B和DRB1的3座位单倍型频率大于0.1％的有11种，其中HLA-A*0207-B*46-DRB1*09单体型频率大于10％，为优势单体型。与A*0206相关的单体型有5种，但频率均在0.1％以下。结论:四川骨髓库汉族人群HLA-A*02等位基因的分布符合南方汉族人群的分布特点，与其他中国人群相比，多态性较低，分布更为集中。单体型为HLA-A*0207-B*46-DRB1*09的患者在四川分库找到供者的机会较大。　　 第二部分:　　 目的:比较脐带源间充质干细胞(Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,UCMSCs)不同的分离培养方法，对获得的MSC进行表面抗原和分化潜能鉴定。方法:脐带取自知情同意的健康足月产妇。比较组织块外植法，胶原酶单独消化法，胰蛋白酶一胶原酶联合消化法3种分离方法。观察原代培养中细胞由开始贴壁到达到完全汇合的生长过程，通过流式细胞术进行表面抗原分析，进行成骨诱导实验鉴定其分化潜能。采用茜素红染色检测细胞表面钙盐沉积，BCIP/NBT显色法分析碱性磷酸酶表达和半定量RT PCR检测骨桥蛋白(osteopontin, OPN)表达水平，研究自发成骨分化现象。通过对照实验比较不同传代汇合度对骨结节生成情况的影响，以优化培养条件。结果:共计处理来自不同个体的6根脐带。采用胰蛋白酶一胶原酶联合消化法能100％分离得到UCMSC，采用组织块外植法成功1例，胶原酶单独消化法成功2例。UCMSC表面抗原呈CD73+, CD90+, CD105+, CD34-, CD45-, CD14-, CD79a-，HLA class II-。对UCMSC进行成骨诱导，7天后开始出现骨结节，且OPN表达水平升高。初期高汇合度传代培养条件下，一些细胞亚群能自发分化为成骨细胞，形成纺锤体状骨结节，直径从0.2mm到2mm不等。在来自不同个体的3根脐带来源的细胞培养过程中都出现了这一现象。进行茜素红染色，发现骨结节区域以及刚出现复层的细胞均呈阳性;进行碱性磷酸酶染色，发现骨结节区域细胞的碱性磷酸酶表达普遍升高，向骨结节迁移的细胞也呈阳性，另外有一些碱性磷酸酶阳性细胞混杂在正常细胞之中。半定量RT PCR测定发现长有骨结节的细胞OPN的表达水平上升。通过对比分析发现传代时细胞汇合度较高是骨结节形成的重要原因之一。结论:胰酶一胶原酶联合消化法是分离脐带源间充质干细胞的较优方案，具有更好的重复性，操作时间较短。在体外培养过程中观察到脐带源间充质干细胞并不是一个均质的群体。其部分细胞亚群自发分化为成骨细胞，且形成骨结节，通过降低传代时细胞汇合度能避免这一现象的发生。