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目 的:研究骨外尤文氏瘤/外周原始神经外胚层肿瘤(骨外ES/pPNETs)的临床病理、免疫组化和超微结构特点,探讨特异性染色体易位t(11;22)及其融合基因EWS-FLI1/ERG等在其诊断和鉴别诊断中的价值和意义。方 法:采用临床病理学观察、免疫组化和电镜技术对55例骨外ES/pPNETs临床病理组织学、免疫表型和超微结构特点进行研究分析;运用一步法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术对30例骨外ES/pPNETs和70例对照肿瘤组常规石蜡包埋组织中EWS-FLI1/ERG和其它软组织肉瘤特异性易位融合基因mRNA的表达进行了检测;应用显色原位杂交(CISH)技术对15例骨外ES/pPNETs和4例对照肿瘤组织中22号染色体EWS基因易位进行了检测并与EWS-FLI1/ERG融合基因检测结果进行了比较。结 果:55例骨外ES/pPNETs年龄17月～59岁(平均21.9岁);男性28例,女性22例;肿瘤发生最常见部位是四肢(52.7%,29/55)、胸肺区(14.5%,8/55)和躯干部(9.1%,5/55),另外头颈部4例(7.3%),腹膜后、盆腔各2例,腹股沟和睾丸各1例。肿瘤多呈结节或分叶状,本组获得资料的25例中,肿瘤最大直径 2.0～20.0cm (平均7.0cm)。组织学上,骨外ES/pPNETs由未分化或分化差的小圆细胞主要呈弥漫性(65.5%)、小叶状或片巢状排列(47.3%)排列,也可呈腺泡状(32.7%)、器官样(10.9%)、乳头状(16.4%)等结构,约80%的病例中存在二种以上上述排列结构。细胞学上,瘤细胞形态大小较一致,浆少或透明、空泡状,核染色质粗颗粒或细粉尘状,本组21例(38.2%)瘤细胞胞浆呈不规则空泡状或透明,22例(40.0%)瘤细胞呈PAS阳性。Homer-Wright菊形团仅见于19例(44.2%)的pPNET,而9例(16.4%)中可见Flevner-wintersteiner菊形团;69.1%的肿瘤发生凝固性坏死。本组43例pPNET、7例骨外尤因肉瘤和5例Askin瘤之间无形态学上明确界限。免疫组化染色CD99呈弥漫的细胞膜强阳性,阳性率为85.5%, NSE、Vim、S-100和Syn的阳性率分别为80.0%、63.6%、47.3%和国家自然科学基金(基金编号:39860073)资助<WP=5>21.3%,弥漫或局灶性表达,本组56.4%(30/55)的病例表达2种以上神经标记;CK呈局灶弱阳性表达 (16.7%)。36例骨外ES/pPNETs中FLI1阳性率为77.8%(28/36),69例对照组肿瘤FLI1阳性率为33.3%(23/69),包括横纹肌肉瘤(10/20)、神经母细胞瘤(2/5)、滑膜肉瘤(4/20)、恶性淋巴瘤(1/5)、粘液性脂肪肉瘤、粒细胞肉瘤、间叶性软骨肉瘤、未分化肉瘤和平滑肌肉瘤均可呈FLI1阳性表达。 4例骨外ES/pPNETs的超微结构主要表现细胞器少或缺乏,糖原较丰富,偶见神经内分泌颗粒和细胞间连接样结构。本组30例石蜡包埋骨外ES/pPNETs组织中25例成功提取RNA,其中20例肿瘤(80.0%)中检测到融合基因EWS-FLI1/ERG mRNA表达,而其它融合基因均为阴性。对照组20例横纹肌肉瘤中6例腺泡状横纹肌肉瘤4例表达PAX3/PAX7-FKHR mRNA,其余14例胚胎型和多形性横纹肌肉瘤为阴性;16例滑膜肉瘤组织中SSX-SYT mRNA表达阳性率为87.5%(14/16);8例隆突性皮肤纤维肉瘤中5例(62.5%)检测出COL1A1-PDGFB mRNA表达;4例腺泡状软组织肉瘤均为ASPL-TFE3融合基因mRNA阳性表达。运用CISH技术在66.7%的(10/15)的10例骨外ES/pPNETs中检测到EWS基因易位阳性信号,结果与本组病例中特异性易位融合基因的检测结果相一致。而对照组均为阴性。结 论:1、骨外ES/pPNETs好发于儿童、青少年,最常见于四肢、躯干部等部位;组织形态属未分化或分化差的小圆细胞恶性肿瘤,主要呈弥漫性、小叶或片巢状排列,也可形成腺泡状、器官样等特殊结构;瘤细胞大小可有差异,浆少或透明空泡状,核染色质粗或细粉尘状,可有或无H-W菊形团或F-W菊形团。pPNET、骨外尤因肉瘤和Askin瘤三者在病理形态、免疫表型、超微结构等方面存在相当程度的重叠表现。 2、骨外ES/pPNETs的免疫诊断应联合CD99/FLI1、vim、NSE和其它神经标记如S-100、Syn、CgA等标记物。FLI1蛋白可能具有与CD99相同的诊断价值。 3、EWS-FLI1/-ERG等和其他特异性易位融合基因mRNA的表达是骨外ES/pPNETs家族肿瘤与其它小圆细胞肿瘤诊断和鉴别诊断的可靠分子指标。4、一步法RT-PCR是一种适用于检测常规石蜡包埋软组织肉瘤组织中特异性融合基因表达的有效方法。CISH技术是一种在常规石蜡切片上检测染色体易位的新方法。