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从近年临床情况了解到,自2011年起全国各地一些猪场纷纷暴发伪狂犬病(pseudorabies,PR),目前猪伪狂犬病已是影响养殖场经济利益及发展的重要病毒疾病之一,所以对养殖场内PRV进行诊断监控是控制该疾病的必要手段,而在多种诊断方法中,ELISA方法不仅特异性强,易于操作,并且经济、省时,也能满足大规模样品的检测需求,非常适合猪伪狂犬病抗体水平的监测。gB蛋白是猪伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)所有糖蛋白中最为保守的蛋白,是伪狂犬病毒囊膜蛋白的一个重要组分和主要免疫原,因此建立一个检测gB抗体的间接ELISA检测方法对于监控临床疫苗免疫情况有着重要意义。本研究通过对PRV-gB基因主要抗原区域进行亲疏水性等分析并根据表位分布,将其分成gBl(98aa-369aa).gB2(370aa-578aa).gB3(541aa-743aa).gB4(820aa-916aa)4段克隆至pET-28a(+)原核表达载体,将重组质粒在原核表达工程菌Rosetta(DE3)pLysS中进行表达,并将表达的蛋白用Ni+亲和层析法进行纯化,用western-blot验证其反应原性。将纯化的gBl.gB2.gB3.gB4蛋白作为抗原进行包被,并摸索ELISA方法建立所需各项筛选条件,选出最适蛋白进行ELISA方法优化.结果表明,gB3蛋白为最适蛋白作为ELISA方法建立的抗原,且最佳条件为包被400ng/孔,在血清稀释液中加入1/200的E.coli裂解液,并以1/100稀释被检血清孵育30min,选择1/400稀释的酶标二抗作用30min,底物作用10min后OD450读数。如此经优化后的gB3-ELISA检测方法与Biochek试剂盒的敏感性为95.12%,特异性为89.13%,符合率为92.97%,该方法具有很高的敏感性及特异性,有很大的应用前景。