MEIS2通过BRCA1调控非小细胞肺癌细胞生长及细胞周期阻滞机制研究

来源 :三峡大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuyantong7
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目的:肺癌是全世界目前面临的最严重公共健康问题之一,MEIS2是HOX基因的辅因子,在胚胎发育过程中起着重要的作用,本课题研究目的为探讨RNA干扰技术沉默MEIS2基因对A549细胞凋亡和周期的影响、通过基因芯片分析技术探讨MEIS2在非小细胞肺癌中的调控机制,及MEIS2与化疗敏感性的相关性。  方法:  (1)将构建成功的4条pLKO.1-MEIS2-MEIS2-shRNA慢病毒载体重组质粒瞬时转染239FT细胞,收集病毒液感染A549细胞(肺腺癌细胞),显微镜下观察细胞形态。运用RT-PCR、western blotting检测MEIS2基因 mRNA及蛋白的表达水平,流式细胞仪检测A549细胞凋亡及细胞周期变化。  (2)基因芯片及生物信息学分析基因差异表达及信号通路的变化, RT-PCR、western blotting检测BRCA1基因mRNA及蛋白的表达水平。  (3)收集宜昌市第一人民医院2012年2月至2016年1月住院手术切除并经病理确诊NSCLC(非小细胞肺癌)的石蜡包埋组织标本61例,收集整理标本对应患者的临床资料,随访患者生存情况。应用免疫组化染色法检测组织中MEIS2及BRCA1的表达,分析两者表达的相关性,并将MEIS2、BRCA1表达纳入生存分析,研究两者与NSCLC术后辅助化疗疗效之间的关系。  结果:  (1)本研究发现有2条pLKO.1-MEIS2-shRNA重组质粒能有效沉默MEIS2的表达。RT-PCR结果提示MEIS2 mRNA表达降低,western blotting结果提示MEIS2蛋白表达也降低,光镜显示A549细胞皱缩、密度稀疏、部分死亡;流式细胞术提示细胞凋亡,细胞周期G2/M期比例增高。  (2)基因芯片检测DAVID分析发现DNA复制及细胞周期信号通路基因表达下调,BRCA1表达下调排第一位。RT-PCR结果提示BRCA1 mRNA水平降低,Western blot结果提示BRCA1蛋白表达也降低。  (3)61例NSCLC患者中,MEIS2和BRCA1的高表达率分别为57.38%(35/61)和65.57%(40/61),两者表达呈正相关。NSCLC患者接受基于铂类药物化疗4~6周期化疗疗效;20例CR+PR(32.8%),41例SD+PD(67.2%),MEIS2低表达患者有效率为21.3%(13/61),而MEIS2高表达有效率为11.5%(7/61),有极显著性差异;BRCA1低表达患者有效率为23.0%(14/61),而BRCA1高表达有效率为9.8%(6/61),有极显著性差异。  结论:shRNA干扰技术可介导A549细胞的MEIS2沉默,MEIS2 mRNA和蛋白水平降低,出现细胞凋亡,G2/M期比例增高。基因芯片技术分析提示BRCA1表达下调排第一位,A549细胞BRCA1 mRNA和蛋白水平相应降低。BRCA1相关分子通路可能是MEIS2的重要下游靶通路,提示MEIS2通过BRCA1基因调控非小细胞肺癌细胞生长及细胞周期阻滞;免疫组化显示MEIS2和BRCA1的表达存在显著正相关,MEIS2和BRCA1的表达与NSCLC术后接受铂类药物化疗的预后相关,MEIS2和BRCA1表达越低,化疗疗效越好。
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