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疟疾是世界范围内危害最严重的一种蚊媒寄生虫病,尤其是对非洲、南美以及东南亚地区产生极大危害。目前,全球每年疟疾临床发病人数在3-5亿,100-300万人死于该病,其中90%的死亡数发生在非洲,绝大部分是5岁以下的儿童。恶性疟原虫(Plasmodium falciparum,Pf)是引起撒哈拉以南非洲地区疟疾感染的主要病原体,能够引起重症疟疾甚至死亡。近年来,由于疟原虫抗药性虫株及抗杀虫剂蚊媒的产生和蔓延,使得疫区防治形势极为严峻,迫切需要研制新型有效的方法用于疟疾防治。因此,研制安全、有效,尤其是能够用于儿童疟疾预防的疫苗已经迫在眉睫。 通过全球科研人员近30年的共同努力,目前已经有多个疫苗候选抗原进入临床实验,其中包括本教研室主研的重组疟疾红内期疫苗PfCP-2.9。该疫苗由恶性疟原虫裂殖子表面蛋白(Merozoite Surface Protein 1,MSP1)和裂殖子顶端膜抗原(Apical Membrane Antigen 1,AMA1)的C-末端区域通过接点序列P28融合而成,并在毕氏酵母中得到高水平分泌表达。以Montanide ISA720为佐剂,能够诱导家兔及猴子产生高水平的抗体滴度,15%的PfCP-2.9免疫血清能有效抑制疟原虫生长。本研究对PfCP-2.9疫苗免疫志愿者体内的抗体特异性进行分析,并利用PfCP-2.9的单克隆抗体对志愿者血清中产生抗体类型进行分析。 PfCP-2.9重组疫苗由MSP1 C末端19kDa片段(MSP1-19)及AMA-1的第Ⅲ亚区(AMA1-Ⅲ)通过接点序列P28融合而成,其中MSP1-19包含两个表皮生长因子样结构域(Epidermal Growth Factor-like domain,EGF-like domain),分别定名为EGF1和EGF2)。为了探讨PfCP-2.9疫苗免疫志愿者产生免疫应答反应的特异性,除本实验室已构建的MSP1-19和AMA1-Ⅲ两个重组蛋白以及P28合成肽外,本研究构建和表达了MSP1-19的两个EGF样结构域即EGF1和EGF2。以含有PfCP-2.9片段的质粒为模板,PCR扩增相应的EGF1和EGF2两个片段,将其克隆至表达载体pPIC9K上,转化毕氏酵母GS115株,并利用G418筛选高表达的克隆,经甲醇诱导分泌表达。用PfCP-2.9免疫小鼠获得的抗血清对表达上清进行Western blot鉴定,在7kDA附近产生明显特异EGF1蛋白条带,但没