【摘 要】
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目的自噬是以胞质空泡化为特征的溶酶体依赖的降解途径,可降解细胞质中受损的结构,使细胞能够适应缺氧、饥饿等条件[1]。在卵巢癌化疗过程中,自噬可以介导卵巢癌细胞对化疗药物[2]的耐药。二甲双胍不仅能抑制多种水解酶的活性,还能稳定溶酶体膜、白细胞膜等多种膜结构。二甲双胍是否能通过调节自噬逆转卵巢癌耐药、铂耐药尚未见报道。我们发现二甲双胍可以抑制化疗药物引起的卵巢癌细胞自噬,提高卵巢癌细胞对化疗药物的敏
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目的自噬是以胞质空泡化为特征的溶酶体依赖的降解途径,可降解细胞质中受损的结构,使细胞能够适应缺氧、饥饿等条件[1]。在卵巢癌化疗过程中,自噬可以介导卵巢癌细胞对化疗药物[2]的耐药。二甲双胍不仅能抑制多种水解酶的活性,还能稳定溶酶体膜、白细胞膜等多种膜结构。二甲双胍是否能通过调节自噬逆转卵巢癌耐药、铂耐药尚未见报道。我们发现二甲双胍可以抑制化疗药物引起的卵巢癌细胞自噬,提高卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性。二甲双胍可通过抑制Akt磷酸化来消除自噬介导的耐药,抑制自噬。我们的研究揭示了二甲双胍对自噬的调控作用及其具体机制,为临床解决肿瘤耐药问题提供了新的方向。方法常规培养卵巢癌A2780和SKOV3细胞株,采用空白对照、二甲双胍、顺铂以及二甲双胍联合顺铂对两种细胞株分别给予干预,构建卵巢癌裸鼠模型,通过MTT还原法检测各组细胞存活情况,Western blot检测二甲双胍作用前后各组细胞自噬相关蛋白LC3-II、凋亡相关基因Bcl-2、cleaved-caspase-3以及PI3-K/Akt信号通路的表达情况和应用PI3-K/Akt抑制剂LY294002后,PI3-K/Akt信号通路的表达。实时定量PCR分析检测各组细胞中自噬相关基因Atg7,Atg5和Beclin1的m RNAs表达水平,应用SPSS19.0版统计分析软件进行统计分析。结果1.MTT法检测显示,单独用顺铂和二甲双胍刺激时卵巢癌细胞株A2780和SKOV3中存活细胞的数量,在顺铂与二甲双胍联合使用后,存活细胞的数量明显减少。2.Western blot检测发现用顺铂刺激卵巢癌细胞A2780和SKOV3,可诱导LC3-II表达增加,加入二甲双胍可显著抑制LC3-II表达的增加。二甲双胍促进顺铂诱导的卵巢癌细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平降低,以及cleaved-caspase-3的表达水平增加。卵巢癌细胞株A2780和SKOV3中,顺铂联合二甲双胍可以抑制Akt分子的磷酸化,顺铂联合二甲双胍与PI3-K/Akt抑制剂LY294002联合可以抑制卵巢癌细胞系Akt磷酸化和LC3-II表达。3.实时定量PCR分析检测各组细胞中自噬相关基因Atg7,Atg5和Beclin1m RNA的表达水平,在A2780和SKOV3卵巢癌细胞中,在二甲双胍顺铂联合治疗后的细胞中的Atg7,Atg5和Beclin1 m RNA的表达水平均显著下降,单用顺铂组与二甲双胍顺铂联合组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论1.二甲双胍可降低顺铂诱导的卵巢癌细胞增殖2.二甲双胍可通过抑制LC3-II的表达抑制自噬3.二甲双胍可促进顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡4.二甲双胍通过抑制自噬相关基因m RNA转录从而抑制自噬5.二甲双胍通过抑制PI3-K/Akt信号通路影响自噬
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