目的:葡萄膜—巩膜细胞外基质重塑机制在很多眼病研究中有重要意义,如前列腺素类药物降眼压机制、近视眼的形成机制等,都与眼局部信号转导调控巩膜基质重塑有关。研究脉络膜黑色素细胞表达基质金属蛋白酶的调控机制,及其对葡萄膜—巩膜细胞外基质重塑过程的影响,可以更好地理解脉络膜黑色素细胞在眼球生长调控中参与局部信号转导的作用机制。本研究的目的是利用体外培养人眼脉络膜黑色素细胞,选择与葡萄膜—巩膜细胞外基质重塑有关的两种因子:前列腺素F_2α与转化生长因子β₂作为刺激因子,观察黑色素细胞表达基质金属蛋白酶及其抑制剂的变化。这个机制不但可以帮助我们更好地理解前列腺素F_2α类药物降低眼压的机制,还有助于探索近视形成过程中,转化生长因子β₂调控细胞外基质重塑的过程。 材料和方法: 1.将人新鲜尸眼的脉络膜组织用胰蛋白酶与胶原酶多次消化,分离得到的细胞用添加胎牛血清、碱性成纤维细胞生长因子、异丁基甲基黄嘌呤、霍乱毒素的F12培养液进行培养、传代、冻存和复苏。用透射电镜、细胞免疫化学染色鉴定细胞性质。 2.将体外培养的人眼脉络膜黑色素细胞随机分为对照组、前列腺素F_2α组、转化生长因子β₂组。前列腺素F_2α组的加入浓度分别为0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml,转化生长因子β₂组的加入浓度分别为0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml。使用倒置显微镜观察细胞的形态,细胞计数法和MTT法分别测定各组细胞的数目与活性。 3.将体外培养的人眼脉络膜黑色素细胞随机分为对照组、前列腺素F_2α组、转化生长因子β₂组,前列腺素F_2α组的终浓度为10μg/ml,转化生长因子β₂组的终浓度