“突尼斯软籽”石榴再生体系和GFP报告基因的瞬时表达研究初报

来源 :河南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lian2008bang
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以‘突尼斯软籽’石榴叶片和茎段为外植体,探讨了‘突尼斯软籽’石榴叶片和茎段的再生体系、不同浓度抗生素对外植体的影响以及GFP报告基因的瞬时表达体系。研究结果如下:1.建立了‘突尼斯软籽’石榴叶片再生体系。研究结果表明:从人工气候室采摘的离体叶片用0.1% HgCl2灭菌4min效果最好;叶片分化愈伤组织的最佳培养基为MS+BA1.0mg/L+ NAA0.3mg/L;诱导不定芽的最佳的培养基为MS+NAA0.3mg/L+TDZ1.5mg/L+KT1.0mg/L;不定芽抽生成茎段,效果最好的培养基为MS+NAA1.0mg/L+BA0.2mg/L+KT1.0mg/L;生根培养基为MS+1/2NAA0.5mg/L,其根系较粗壮,生根移栽后的成活率可达85%。2.建立了‘突尼斯软籽’石榴茎段再生体系。研究结果表明:从人工气候室采摘的离体茎段用0.1% HgCl2灭菌3min效果最好;茎段分化愈伤组织的最佳培养基为MS+ NAA 0.1 mg/L + TDZ 1.0mg/L ;愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为MS+NAA0.2mg/L+TDZ1.0mg/L+KT1.0mg/L ;不定芽抽生茎段,效果最优的培养基为MS+NAA0.2mg/L+KT1.0mg/L;之后将这些茎段放入生根培养基MS+1/2NAA0.5mg/L后,产生比较粗壮的根系,生根之后移栽即可成活,成活率可达85%以上。3.比较了两种‘突尼斯软籽’石榴再生体系的优越性。研究结果表明:综合各种因素,叶片再生效果比茎段效果更佳。4.筛选了‘突尼斯软籽’石榴外植体对聚乙烯吡咯烷酮的浓度。研究结果表明:聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度为1.0g/L时效果最佳。5.筛选了‘突尼斯软籽’石榴抗生素的浓度。研究结果表明:卡那霉素(Kan)的浓度为50mg/L时,愈伤组织受到明显抑制,可以用来筛选转基因材料;头孢霉素(Cef)的浓度为500mg/L时,可以有效抑制菌株的生长。6.初步研究了GFP报告基因的瞬时表达情况。但结果表明:转化材料与对照均发出绿色荧光,两者差异不明显。
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