肿瘤细胞比正常细胞具有更强的增殖能力,为满足其快速增殖,肿瘤细胞内DNA复制非常活跃,是肿瘤化疗药物的主要靶点。临床上普遍应用的肿瘤化疗药物多属于DNA毒性药物,如阿霉素,顺铂及其衍生物,环磷酰胺等,都是以损伤快速复制的DNA为目的来阻断肿瘤细胞的快速增殖。然而,由于这些化疗药物对机体内正常细胞,特别是增殖活跃的造血干细胞等的DNA也有损伤,接受化疗的肿瘤病人通常会出现严重的毒副作用。因此,在临床上,如何减轻肿瘤化疗的毒副作用也已成为重要的问题。普洱茶是地处中国西南地区的的一种茶饮,经独特的发酵工艺而成。普洱茶所处地区的特殊地理条件以及气候条件使其具有医学保健功效。现代生物医学研究也表明,普洱茶不但具有降血糖、降血脂、降血压等作用,还具有抗炎、减肥等生物学功用。最近的研究证实,普洱茶在抗肿瘤方面也具有独特功效,它可以明显杀伤一些肿瘤细胞,而对正常细胞影响较小。热休克蛋白(heat shock protein, HSP)在细胞应激环境压力(例如热、紫外射线、化学药物等)的过程中起着重要作用,与细胞的存活或凋亡有一定关系。热休克蛋白在一些肿瘤细胞中的高表达提示其与肿瘤的发生和维持有关,因此热休克蛋白已成为抗肿瘤治疗的一个重要靶点。p53在应激DNA损伤的分子通路中起着关键的枢纽作用。DNA损伤的情况下,p53可以引起细胞周期的阻止使细胞进入修复程序,损伤严重的细胞则直接进入凋亡过程,因此p53决定了细胞的命运。然而,突变的p53不但失去了正常的监控功能,反而获得了一些促进肿瘤发生与发展的新功能,所以p53也已成为抗肿瘤治疗的另一个重要靶点。本实验室之前研究中意外发现,在普洱茶处理小鼠细胞后,热休克蛋白的表达水平降低。此发现使我们关注在DNA损伤刺激后,普洱茶的作用对细胞存活的影响。本课题使用普洱茶水提取物,利用野生型小鼠成纤维细胞(mouse embryo fibroblast, MEF),研究化疗药物处理的条件下,普洱茶对小鼠正常细胞或肿瘤细胞的影响。本论文的实验结果发现,化疗药物处理小鼠正常细胞后,细胞凋亡严重；而在辅以普洱茶的情况下,化疗药物处理后,细胞的凋亡程度明显降低。进一步的实验发现,在辅以普洱茶处理的情况下,热休克家族蛋白HSP70/90的应激水平以及p53的应激表达明显低于单独化疗药物处理的情况。结果提示我们,普洱茶通过降低热休克蛋白的应激水平,降低了小鼠正常细胞对化疗药物的敏感性,从而起到了保护正常细胞的作用；另一方面普洱茶降低了DNA损伤应激所致的p53的表达水平,使p53通路介导的细胞凋亡减少,从而增加了细胞的存活量。接下来,我们以p53-/-+S+Ras的小鼠肿瘤化细胞和SK-BR-3的人类乳腺癌细胞为实验对象,研究化疗药物处理的条件下,普洱茶对两株细胞的影响。结果发现,普洱茶明显增加了两株细胞对化疗药物的敏感性,普洱茶与化疗药物共处理的情况下,两株细胞的凋亡程度较之单独化疗药物处理的情况明显增强。我们同样对此两株细胞中HSP70/90的应激水平和p53的表达水平进行了检测,结果表明,普洱茶对p53-/-+S+Ras细胞的增敏作用可能是通过降低突变p53的表达水平实现的。而SK-BR-3细胞中HSP70/90以及p53的蛋白表达水平在共处理和化疗药物单独处理的情况下并没有明显变化,提示普洱茶对此株细胞的增敏作用不是通过HSP70/90和p53这两个靶点来实现的。具体的作用机制有待进一步研究。综上所述,本论文研究通过细胞试验,发现了普洱茶可以用于辅助肿瘤化疗的新用途,并在相关分子机理方面进行了初步实验探索,取得了阶段性的成果。本课题接下来将利用动物模型,进一步在动物个体水平上验证普洱茶辅助肿瘤化疗的生物效应。