欧美杨细菌性溃疡病菌侵染循环及病害流行研究

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欧美杨细菌性溃疡病是欧美杨的重要病害之一。病原菌经鉴定为Lonsdalea quercina subsp. populi,在我国是新纪录亚种。该病害发生面积较大,对欧美杨危害严重,但病害的侵染循环尚不清楚。为了更好地控制病害,对病害的发生发展规律研究显得尤为迫切。本研究根据欧美杨溃疡病病菌的特点,设计特异性引物,建立病菌的检测方法,对欧美杨溃疡病发病早期的病菌数量、病菌侵入后在树体的分布、病害的侵染循环和流行规律等进行研究,得到如下主要结果:1.利用L. quercina subsp. populi菌株N-5-1全基因组测序结果,设计了一对特异性引物LqiR/LqiF,应用Real-time PCR的方法,对10个欧美杨细菌性溃疡病病原细菌菌株(N-5-1,4-4, A2210, A2213, A2223, BX001, BX004, BX005, BZ008, BZ009)、3个与病原菌同种但不同亚种的模式菌株(ATCC29281, LMG26264, LMG26267)、其它亲缘关系较近的36个细菌菌株进行了检测。结果表明,该特异性引物能检测出10个欧美杨细菌性溃疡病菌株,溶解温度为86.05℃,显示出了该引物的特异性,该方法可以检测出的DNA最低浓度为0.1pg。成功建立了欧美杨细菌性溃疡病病菌的实时荧光PCR检测方法。2.建立了欧美杨细菌性溃疡病菌数量与病害显症的分子定量法,测定L. quercina subsp. populi侵染欧美杨植株后不同时间的种群量及其变化。在28℃条件下,接种3d的枝条组织内己经开始有菌量积累,但枝条组织并没有显症;接种第9d开始,细菌数量增加,枝条显症病情加重;接种9-13d细菌菌量增加到峰值,植株显症严重。用Real-time PCR分子定量法可以直接对欧美杨植株内的病原菌种群数量进行动态定量研究。3.应用建立的检测技术对欧美杨细菌性溃疡病菌侵染循环进行研究,初步明确病菌的如下侵染特性。(1)病原菌主要通过伤口侵入欧美杨,侵入寄主后引起寄主树皮组织细胞壁消解,细胞解体,形成较大的空腔,而木质部组织细胞壁加厚,导管内形成侵填体。病原菌在欧美杨植株体内主要分布在接种点附近的皮层组织、形成层和与其相邻的浅层木质部中,病原菌对欧美杨的侵染是局部侵染。(2)病原菌在先年病斑中越冬。(3)在人工网室内种植的欧美杨上接种带有病菌的四斑露尾甲和白星花金龟,显示着两种昆虫可以作为欧美杨溃疡病菌的携带者。(4)病菌在杨树植株体内单位重量周年变化表现为,夏季达到高峰,冬季达到低谷,高峰与低谷之间含量差距达到百倍以上。这种变化趋势,与在林间病害发病率调查的结果基本一致。4.采用聚集度指标、Iwao的回归分析法和Taylor的幂法则研究了欧美杨细菌性溃疡病病株的空间分布格局。结果表明,病株的分布格局主要以聚集分布为主,在林间存在明显的发病中心。应用Blackith的种群聚集均数λ分析欧美杨细菌性溃疡病聚集的原因,发病初期聚集分布的原因可能是由于环境条件引起的,欧美杨发病盛期,随着病株密度的升高,该病害呈现均匀分布,其成因可能是由于病原菌本身的聚集行为与环境因素共同影响所致。
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