【摘 要】
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[目 的]研究天麻素对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤（HIBD）与体外脂多糖（LPS）激活的小胶质细胞CX3CL1/CX3CR1-p38MAPK的表达,小胶质细胞M1型和M2型极化状态的影响,探究天麻素对HIBD发挥保护作用的分子机制,为临床上治疗新生儿HIBD提供理论依据。[方法]本课题分体内实验和体外实验两部分。体内实验:将新生3d的 Sprague-Dawley 大鼠随机分为 Sham 组、HIB
【基金项目】
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国家自然科学基金（31760297）
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[目 的]研究天麻素对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤（HIBD）与体外脂多糖（LPS）激活的小胶质细胞CX3CL1/CX3CR1-p38MAPK的表达,小胶质细胞M1型和M2型极化状态的影响,探究天麻素对HIBD发挥保护作用的分子机制,为临床上治疗新生儿HIBD提供理论依据。[方法]本课题分体内实验和体外实验两部分。体内实验:将新生3d的 Sprague-Dawley 大鼠随机分为 Sham 组、HIBD 组和 G+HIBD 组。G+HIBD组进行三次腹腔注射天麻素,给药时间为造模前1h、缺氧后立即和缺氧后12 h给药（100 mg/kg）。其中HIBD组和G+HIBD组的新生大鼠进行左侧颈总动脉结扎,置入缺氧箱缺氧21h（缺氧条件:8%O2,92%N2）。应用Western Blot和免疫荧光双标染色检测新生大鼠胼胝体内CX3CL1/CX3CR1-p38MAPK及小胶质细胞M1型标记物CD86和TNF-α、M2型标记物YM1/2和Arg-1的表达变化。体外实验:选用BV2小胶质细胞为研究对象,随机分为Control组、LPS组和G+LPS组。G+LPS组天麻素（0.34 mmol/L）预处理1h,LPS组和G+LPS组中加入LPS作用3 h。应用Western Blot和免疫荧光双标染色检测BV2小胶质细胞 CX3CR1、p38MAPK 和 P-p38MAPK,M1 型标记物 CD86 和 TNF-α、M2型标记物YM1/2和Arg-1的表达变化。[结果]体内实验:（1）Western Blot结果显示,与Sham组相比,新生大鼠 HIBD后1d、3d和7d 胼胝体区 CX3CL1、CX3CR1、P-p38/p38 MAPK的蛋白表达升高（p＜0.05）,小胶质细胞M1型标记物CD86和TNF-α、M2型标记物YM1/2和Arg-1的蛋白表达升高（p＜0.05）;天麻素干预后,胼胝体区CX3CL1、CX3CR1 和 P-p38/p38 MAPK 的蛋白表达降低（p＜0.05）,M1 型标记物CD86和TNF-α的蛋白表达也降低（p＜0.05）,M2型标记物YM1/2和Arg-1的蛋白表达进一步升高（p＜0.05）。（2）免疫荧光双标染色结果显示,与Sham组相比,新生大鼠HIBD后胼胝体区的小胶质细胞数量增多,CX3CL1、CX3CR1和P-p38MAPK的荧光表达增强（p＜0.05）,小胶质细胞M1型标记物CD86和TNF-α、M2型标记物YM1/2和Arg-1的荧光表达增强（p＜0.05）;与HIBD组相比,天麻素降低了 CX3CL1、CX3CR1、P-p38MAPK的荧光表达（p＜0.05）,也降低了 M1型标记物CD86和TNF-α的荧光表达（p＜0.05）,而增强了 M2型标记物YM1/2和Arg-1的荧光表达（p＜0.05）。体外实验:（1）Western Blot结果显示,与Control组相比,LPS组BV2小胶质细胞CX3CR1和P-p38/p38 MAPK蛋白表达增加（p＜0.05）,M1型标记物CD86和TNF-α、M2型标记物YM1/2和Arg-1蛋白表达增加（p＜0.05）;天麻素干预后,BV2小胶质细胞CX3CR1和P-p38/p38 MAPK、M1型标记物CD86和TNF-α蛋白表达降低（p＜0.05）,而M2型标记物YM1/2和Arg-1的蛋白表达升高（p＜0.05）。（2）免疫荧光双标染色结果显示,与Control组相比,LPS组BV2小胶质细胞CX3CR1和P-p38MAPK的荧光表达增强（p＜0.05）,M1型标记物CD86和TNF-α、M2型标记物YM1/2和Arg-1的荧光表达增强（p＜0.05）;天麻素降低了 BV2小胶质细胞CX3CR1和P-p38MAPK、M1型标记物CD86和TNF-α的荧光表达（p＜0.05）,增强了 M2型标记物YM1/2和Arg-1的荧光表达（p＜0.05）。[结论]（1）新生大鼠HIBD后胼胝体区神经元CX3CL1、激活的小胶质细胞CX3CR1、P-p38/p38 MAPK的表达增加,胼胝体区激活的小胶质细胞和体外LPS激活的BV2小胶质细胞M1和M2型标记物表达均增加。（2）天麻素干预显著抑制了CX3CL1/CX3CR1-p38MAPK的表达,抑制M1型小胶质细胞极化,促进小胶质细胞向M2型极化,从而发挥神经保护作用。
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