N-糖酰胺酶F(PNGase F)主要是由革兰氏阴性菌-脑膜炎脓杆菌分泌的一种分子量为34.8kDa的去糖基化酶。具有广泛的底物专一性，对所有类型的N-连接的糖蛋白都有作用，能从糖蛋白完整切下N-寡糖链，其作用位点是N-乙酰葡萄糖胺残基和天冬酰胺之间的价键结构，同时将蛋白质的天冬酰胺残基转化为天冬氨酸，生成的氨基寡糖链随后水解成氨气和寡糖。本研究首先通过PCR技术扩增出945bp的N-糖酰胺酶F基因，经酶切、连接，构建了大肠杆菌表达载体pET28a-PNGase F。将pET28a-PNGase F转入大肠杆菌BL21中，16℃诱导表达及Ni柱纯化后，SDS-PAGE鉴定，获得超过95％纯度的可溶性表达的N-糖酰胺酶F。对以后N-糖酰胺酶F的相关研究起到了重要的推动作用。　　钠离子偶联的中性氨基酸转运蛋白(Sodium-coupled Neutral Amino Acid Transporter，SNAT)属于SLC38基因家族。SLC38家族又分为System A和System N两个亚族，其中SNAT1和SNAT2属于System A，SNAT3属于System N，具有重要的生理功能，其功能紊乱可引起神经退行性疾病。我们通过分子克隆技术构建了pBK-CMV△-SNAT3-HA重组质粒，并通过Western blot技术证明SNAT3-HA融合蛋白正常表达，且能正常定位于细胞膜上。为了检测纯化的N-糖酰胺酶F脱糖基化功能，本文以SNAT1、SNAT2和SNAT3为底物，通过检测它们经N-糖酰胺酶F消化后在SDS-PAGE中迁移率的变化来研究N-糖酰胺酶F的脱糖基化作用。证明我们纯化的PNGase F具有高效的脱糖基化功能，同时证实了SNAT1、SNAT2和SNAT3分子中含有糖基化位点的假设。这对研究SNAT1、SNAT2和SNAT3的结构与功能提供了有效的工具。　　Na+偶联的中性氨基酸转运蛋白SNAT1被预测具有11个跨膜区域，其N端在细胞内，C端在细胞外。本研究通过将潜在糖基化位点中的Asn突变成Gln，利用Western-blot技术通过蛋白质电泳迁移率的变化研究SNAT1中糖基化位点的数量及位置，证明了SNAT1中存在两个糖基化位点，分别为N251和N257位。为SNAT1膜拓扑结构的进一步研究起到了重要的辅助作用。　　目前，还没有特别适用的有效SNAT1特异性抗体，极大地阻碍了SNAT1结构与功能的深入研究。本研究通过分子克隆的方法构建了一个蛋白表达载体pET28a-SNAT1-75aa，通过诱导表达纯化后，将SNAT1 N端75个氨基酸作为免疫原，经过3次免疫注射新西兰大白兔获得血清，利用巯丙基琼脂糖凝胶6B亲和纯化后，获得了SNAT1特异性的抗体。为以后SNAT1结构与功能的深入研究提供了有效的工具。