大豆子房原位转化法是通过花粉管通道法优化发展起来的一种原位转化技术,与传统遗传转化技术相比,具有周期短、成本低、不受基因型限制等优点,但转化技术体系仍有待完善。本研究通过最小化基因盒设计与子房原位转化田间花朵优选,完善了转基因技术体系,获得转基因材料；建立大豆草甘膦耐性表型鉴定点施筛选新方法,通过草甘膦筛选与分子鉴定结合的转基因创制体系,对子房原位转化获得的大豆及后代材料进行鉴定,获得的可遗传耐性转基因大豆,为耐草甘膦大豆新品种的培育奠定工作基础。主要研究内容如下：1、草甘膦耐性快速鉴定及药害修复试剂筛选通过草甘膦点施筛选方案,获得栽培大豆品种的株高半抑制浓度IC50值,鉴定大豆微核心种质,发现不同大豆品种对草甘膦耐性存在差异；耐性转基因大豆在高浓度草甘膦条件下也存在着药害反应,会影响生产上的进一步应用,本研究采取高、低两种浓度的芳香族氨基酸(色氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸)以及赤霉素、生长素进行草甘膦药害-恢复实验,发现色氨酸是一种转基因大豆潜在的安全剂。2、子房原位转化技术体系的完善设计了含有章鱼碱型或胭脂碱型农杆菌的T-DNA左、右边界序列的两种类型的最小化G6-epsps基因盒,命名为12-1与12-2；以此为基础结构,去掉其中的一个启动子序列,对应的含有左、右边界序列的M1、M2以及不含左、右边界MO最小化基因盒。通过不同品种中最小化基因盒转化结荚情况的调查,建立了田间转化花朵优选方案：以主茎8-15个节位上以及粗壮分枝开放的花朵为主；花序轴上以基部节腋处先期开放花朵为主；进行“整行”或“整株”转化,可以提高单位时间内转化花朵数量。3、耐草甘膦转基因大豆创制将12-1和12-2两种最小化基因盒通过子房原位法转化中黄56、中黄57、与1个晚播品种绿75三个大豆品种,获得T0转化种子,经过200ml/亩草甘膦大田剂量喷施与PCR分子鉴定筛选得到31份耐除草剂可育大豆。经400m1/亩草甘膦筛选,可获得4份高耐转基因大豆;有2份材料遗传分离比为3：1,符合孟德尔分离定律,推测为单基因插入；T3代材料草甘膦筛选仍可获得抗性植株,表明子房原位转化获得的转基因植株抗草甘膦特性可以遗传给后代。