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睾丸支持细胞（SCs）是促使睾丸产生正常精子的重要细胞之一,因此维持SCs的生理功能十分重要。高温天气会导致猪发生热应激（HS）反应,损害公猪的精子质量,制约生猪产业的发展。PTD-FNK是抗凋亡蛋白FNK与蛋白转导域（PTD）融合的一种人造抗凋亡蛋白,在临床应用上对细胞凋亡有一定的保护作用。它作为一种新型的抗凋亡蛋白,在保护仔猪SCs免受HS等方面还未有深入的研究。因此,本研究以仔猪SCs为研究对象,构建猪SCs的HS模型,探究PTD-FNK对HS诱导SCs损伤的保护作用,为缓解夏季高温造成的公猪精子质量降低提供新的思路。具体研究内容及结果如下:1.SCs体外HS模型的建立及PTD-FNK浓度筛选。SCs通过CCK8法筛选HS（37℃、39℃、41℃、43℃、47℃）条件及PTD-FNK（0.01 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L）的最适作用浓度,用筛选后的条件分别处理细胞,将细胞分为空白组（Control）、热应激组（HS）、热应激+蛋白组（HS+PR）,q PCR检测PTD-FNK对HS诱导猪SCs血睾屏障损伤的保护作用。结果显示,经HS（43℃,1 h）处理后的SCs活率极显著降低（P＜0.01）,但在HS前经0.1 nmol/L PTD-FNK预处理1 h后的SCs活率极显著升高（P＜0.01）。HS显著下调SCs中Claudin-1、ZO-1、Cx43 m RNA（P＜0.01）和Occludin m RNA（P＜0.05）的表达;与HS组相比,PTD-FNK预处理后显著上调Claudin-1、Cx43 m RNA（P＜0.001）和Occludin、ZO-1 m RNA（P＜0.05）的表达。2.PTD-FNK对SCs凋亡、抗氧化能力及线粒体功能的影响。q PCR检测凋亡基因及线粒体动力学相关基因的表达,试剂盒检测T-AOC、SOD活性、MMP及MDA、ROS、ATP和Cyt C含量。结果显示,（1）在细胞凋亡方面,HS显著上调SCs内Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、HSP70 m RNA（P＜0.01）和Bax m RNA（P＜0.001）的表达,显著下调Bcl-2 m RNA的表达（P＜0.01）;与HS组相比,HS+PR显著下调SCs内Caspase-3、Bax m RNA（P＜0.01）和Caspase-8、HSP70 m RNA（P＜0.05）的表达,显著上调Bcl-2 m RNA的表达（P＜0.05）。（2）在氧化应激方面,与Control组相比,HS组细胞内MDA含量（P＜0.05）和ROS含量（P＜0.001）显著升高,T-AOC和SOD活力极显著降低（P＜0.01）;与HS组相比,HS+PR组MDA含量（P＜0.05）和ROS含量（P＜0.01）显著下降,T-AOC（P＜0.05）和SOD活力（P＜0.01）显著升高。（3）在线粒体功能方面,与Control组相比,HS组细胞MMP和ATP生成量（P＜0.01）极显著降低,Cyt C（P＜0.001）和Ca2+（P＜0.01）的含量极显著升高;与HS组相比,HS+PR组MMP（P＜0.001）和ATP生成量（P＜0.01）极显著升高,Cyt C含量（P＜0.01）和Ca2+含量（P＜0.05）显著降低。q PCR结果显示,与Control组相比,HS显著上调SCs内Cyt C、Drp1 m RNA（P＜0.05）和Opa1 m RNA（P＜0.01）的表达,极显著下调Mfn1 m RNA的表达（P＜0.01）;与HS组相比,HS+PR显著下调SCs内Cyt C（P＜0.01）、Drp1（P＜0.001）和Opa1（P＜0.05）m RNA的表达,显著上调Mfn1、Mfn2 m RNA的表达（P＜0.05）。3.PTD-FNK影响猪睾丸SCs抗热应激能力的转录组学分析。对3组细胞进行转录组测序分析,q PCR检测PTD-FNK能否通过调节PI3K/Akt信号通路发挥作用。结果显示,Control组与HS组相比共有270个差异表达基因（193个上调,77个下调）,HS组与HS+PR组相比共有3 649个差异表达基因（1 430个上调,2 219个下调）。Control组与HS组和HS组与HS+PR组经GO和KEGG通路分析发现,差异表达基因中富集的通路包括氧化磷酸化、PI3K/Akt及MAPK信号通路等。q PCR结果显示,各组细胞经2μmol/L LY294002处理后,细胞活率显著降低（P＜0.05）。与Control组相比,Control+LY组ROS含量（P＜0.001）、Caspase-3和Cyt C m RNA（P＜0.01）及Bax m RNA（P＜0.05）表达显著升高,Bcl-2 m RNA的表达显著降低（P＜0.05）;与HS组相比,HS+LY组ROS含量、Cyt C、Caspase-3 m RNA（P＜0.01）和Bax m RNA（P＜0.05）的表达显著降低,Bcl-2 m RNA表达显著升高（P＜0.05）;与HS+PR组相比,HS+PR+LY组ROS含量（P＜0.01）和Caspase-3 m RNA（P＜0.05）的表达显著降低。结论:PTD-FNK可能通过调节PI3K/Akt信号通路及凋亡因子的表达、减少细胞凋亡,或维持线粒体功能及MMP的稳定,抑制ROS、Cyt C和Ca2+的释放,增强细胞的抗氧化能力,或维持BTB的完整性等方面来缓解HS诱导的猪SCs的损伤。