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乳铁蛋白(LF)是一种存在于哺乳动物外分泌液中的糖蛋白。它具有多种生物活性功能,如广谱抗菌活性、增强铁的传递和吸收、免疫调节作用、调节发炎反应、抗病毒作用和抑制脂肪氧化作用,可广泛应用于食品、医药和化妆品等领域。本实验建立快速,准确的乳铁蛋白胶体金检测法。通过纯化LF,LF多克隆抗体的制备,胶体金方法的建立和优化等实验。初步建立起来了乳品中乳铁蛋白胶体金检测法。在实验室条件下研究了离子交换层析技术纯化LF的层析条件。选用带羧甲基的弱酸性阳离子交换CM-SepHarose Fast Flow进行动态吸附,选用质量分数为1.6%和5%的NaCl溶液进行阶跃洗脱;重复层析和对洗脱峰分别进行接样的方法,获得的LF纯度达到96.7%,浓度达到3.2mg/ml。LF多克隆抗体的制备:本实验以新西兰大白兔和高产罗曼蛋鸡为免疫对象,新西兰大白兔免疫剂量为1mg/kg,免疫周期为三周,免疫次数四次。罗曼蛋鸡免疫剂量为0.5mg/kg,免疫周期为两周。抗血清及卵黄的处理均采用饱和硫酸铵沉淀法,50%,33%两个饱和度反复沉淀。间接ELISA法测效价,抗血清为1:48000。胶体金检测LF方法的建立和优化。从检测波长,最佳金探针浓度、最佳溶液PH值、检测温度、稀释液中BSA的浓度和作用时间段六个影响因素进行探讨,得出最佳检测条件即检测波长为630nm;金探针最佳浓度为1:2;最佳PH值为7.4;稀释液中BSA的浓度为15 ug/ml;最佳检测温度为25℃;作用时间段为0-20min。以检测牛乳中的LF为例,建立起一个新的快速检测方法模式,方法评价和应用。本实验以检测牛乳中的LF为例,通过批内和批间重复性试验、回收试验、方法对比试验来评价这种检测方法。并在检测牛常乳和牛初乳中进行应用,进一步证明了此方法的可行性和实用性。结果表明:该法敏感性高,检测范围10-2500ng/ml,回收率95.89%,批内变异系数CV%=3.57%,批间CV%=4.74%。