β-CPP对硅磷酸钙骨水泥的理化性质及其体外生物相容性的影响

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实验目的:(1)尝试在硅磷酸钙(C3S+MCPM)系骨水泥中添加β-焦磷酸钙(β-Ca2P2O7,β-CPP),以期能够调节其固化时间,改善其降解性与生物活性。(2)评价骨水泥对体外培养的MC3T3-E1细胞的毒性和影响,并对相关基因表达水平进行了研究。实验方法:(1)用吉尔摩(Gilmore)双针法测定复合骨水泥的固化时间;采用模拟体液(SBF)浸泡实验测定骨水泥的生物学活性。通过浸提液的pH值及其不同时间降解率的变化,并结合SEM和XRD对其微观结构进行观察,描述β-CPP的添加对骨水泥理化性质的影响及规律;(2)通过实时定量PCR对MC3T3-E1细胞E型细胞周期蛋白(CyclinE1)及增殖细胞核蛋白Ki67的表达水平进行定量分析,并与MTT法做对比,旨在探讨该复合材料的体外生物相容性。实验结果:(1)随着复合材料中β-CPP含量的增大,固化时间增加。(2)复合材料具有良好的降解性,而且随着β-CPP百分比的增大,骨水泥的降解率上升。复合骨水泥浸泡过程中pH值一直保持在9.5-8.0之间。(3)MTT结果表明,浓度为12.5mg·mL-1~100mg·mL-1时实验组浸提液对MC3T3-E1细胞没有明显的毒性作用,一定浓度的含β-CPP骨水泥的浸提液能刺激细胞的增殖。(4)实时定量PCR结果显示,不含β-CPP骨水泥不同浓度的浸提液培养6h后,MC3T3-E1细胞CyclinE1和Ki67mRNA水平与对照组相比仅有少量提高;添加55%wt β-CPP的骨水泥上述2个基因mRNA水平均显著增高。其中CyclinE1mRNA水平在浸提液浓度为50mg·mL-1和25mg·mL-1时,分别比对照组增加了90.18%和120.26%;Ki67mRNA水平在同样的浓度时分别比对照组增加了31.48%和41.61%。实验结论:添加β-CPP使(C3S+MCPM)系骨水泥的固化时间延长,降解速率增加,细胞增殖率和基因表达量也得到一定提高。结果提示,制备的这种含β-CPP的硅磷酸钙复合骨水泥具有良好的生物活性,MC3T3-E1细胞CyclinE1、Ki67基因表达量的变化可以作为评价材料生物相容性的一种潜在方法。
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