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本文研究了芽孢乳杆菌、扣囊内孢霉和鼠李糖乳杆菌等两种菌或三种菌共生发酵的最优化条件,制备了芽孢乳杆菌复合益生素,用三黄鸡进行了动物试验,为芽孢乳杆菌益生素的开发与应用奠定了基础。
通过设置不同的接种比例、接种量、培养温度、培养时间和接种顺序,采用正交设计来优化芽孢乳杆菌和扣囊内孢霉、芽孢乳杆菌和鼠李糖乳杆菌、芽孢乳杆菌和扣囊内孢霉及鼠李糖乳杆菌共生发酵的条件;通过比较共生发酵培养物的生物量、pH值及对指示菌的抑制作用,确定共生发酵的最佳条件,制备出芽孢乳杆菌复合益生素。
选用1日龄三黄鸡280只,分为14个组,每组设2个重复,各10只雏鸡。对照组饲喂基础日粮;抗生素组饲喂添加0.2%恩诺沙星的基础日粮;试验组分别饲喂添加有芽孢乳杆菌复合益生素A、B、C或D的基础日粮,添加量为0.5%、1.0%、1.5‰试验共进行8周。每周称耗料量及鸡体重,结算平均日采食量、日增重;试验鸡分别于28、56日龄测定血清钙、磷、总蛋白、白蛋白、总胆固醇、IgG、IgA、溶菌酶的含量,于28、56日龄测定淋巴细胞转化率、免疫器官指数及盲肠内容物大肠埃希菌和乳酸菌菌群的数量,于21、28、35、42、49、56日龄测定血清新城疫HI抗体效价。
试验结果表明:
1.芽孢乳杆菌和扣囊内孢霉共生发酵的优化条件为:两种菌的接种量为2%,接种比例为1:2,芽孢乳杆菌先接种6h,28℃、120r/min振荡培养48h,再静置发酵72h。
2.芽孢乳杆菌和鼠李糖乳杆菌共生发酵的优化条件为:两种菌的接种量为1%,接种比例为1:1,芽孢乳杆菌先接种24h,37℃、120r/min振荡培养24h,再静置发酵48h。
3.芽孢乳杆菌、扣囊内孢霉和鼠李糖乳杆菌共生发酵的优化条件为:三种菌的接种量为1%,接种比例为1:2:1,芽孢乳杆菌先接种12h,鼠李糖乳杆菌先接种6h,28℃、120r/min振荡培养72h,再37℃静置发酵72h。
4.芽孢乳杆菌复合益生素A有提高三黄鸡平均日增重和降低料重比的趋势;提高了三黄鸡血清钙、总蛋白、白蛋白、球蛋白含量(P<0.05);提高了三黄鸡生长前期血清溶菌酶和IgG的含量(P<0.05),提高了新城疫血清HI抗体效价(P<0.05);提高了三黄鸡盲肠乳酸菌菌群数量(P<0.05),降低了三黄鸡生长前期盲肠大肠埃希氏菌菌群数量(P<0.05)。
5.芽孢乳杆菌复合益生素B有提高三黄鸡平均日增重,降低料重比的作用,促生长作用在三黄鸡生长后期表现明显;复合益生素B提高了三黄鸡血清磷、总蛋白、白蛋白、球蛋白的含量(P<0.05),且降低了28日龄三黄鸡的白球比(P<0.05);提高了三黄鸡生长前期的淋巴细胞转化率(P<0.05),提高了乳酸菌菌群数量(P<0.05),降低了生长前期盲肠大肠埃希氏菌菌群数量(P<0.05)。
6.芽孢乳杆菌复合益生素C能提高三黄鸡血清磷、总蛋白、球蛋白的含量(P<0.05);能提高乳酸菌菌群数量(P<0.05),降低了生长前期盲肠大肠埃希氏菌菌群数量(P<0.05)。
7.芽孢乳杆菌复合益生素D能不同程度地提高三黄鸡平均日增重和降低料重比,促生长作用主要体现在三黄鸡生长前期;复合益生素D能提高三黄鸡血清总蛋白、白蛋白、球蛋白的含量(P<0.05),并且能降低56日龄三黄鸡的自球比(P<0.05);能提高新城疫HI抗体效价(P<0.05),提高三黄鸡脾脏和法氏囊指数(P<0.05),对于生长后期的三黄鸡,能提高淋巴细胞转化率(P<0.05)。
综合以上结果,认为本试验所选用的两种菌或三种菌是可以共生发酵的,优化出的发酵条件是理想的,制备出的芽孢乳杆菌复合益生素均有提高三黄鸡生长性能和免疫功能的作用。其中,芽孢乳杆菌复合益生素A的适宜添加量为1%,芽孢乳杆菌复合益生素B、C、D的适宜添加量为1%~1.5%,以芽孢乳杆菌复合益生素D的应用效果最好。