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目的:(1)研究pcDNA3.0-tyr 在正常人成纤维母细胞株(GM0639 细胞)中的表达;(2)探讨tyr 基因表达MR 成像的相关因素;(3)评价1.5 T MR 机观察研究pcDNA3.0-tyr 在SHG44 荷瘤裸鼠体内表达。方法:(1)采用氯化钙法pcDNA3.0-tyr 真核表达载体导入大肠杆菌DH5α菌珠,氨苄青霉素筛选,挑取阳性克隆接种培养,按质粒抽提试剂盒提取、纯化质粒,经测序、酶切后琼脂凝胶电泳鉴定;选择真核细胞电击模式,pcDNA3.0-tyr 转染GM 细胞,提取总RNA,RT-PCR 检测,取PCR 产物进行琼脂凝胶电泳,利用DNA Marker 鉴定扩增片段大小的正确性;测定490 nm 吸光度值,细胞爬片Fontana 染色,证实酪氨酸酶基因表达及其表达水平;(2)细胞种类及量均相同,转染量分别为5μg、10μg、15μg、20μg pcDNA3.0-tyr 载体及pcDNA3.0 空载体10μg,比较各自MRI 信号强度的变化;(3)不同细胞含量,依次为1×106、5×105、2.5×105、1.25×105、6.25×104,各加入10μg pcDNA3.0-tyr 质粒,比较各自信号强度的差异;(4)细胞量、转染质粒量相同,转染后继续培养用的完全培养基中的硫酸铁含量不同,终浓度分别为0.5μg Fe/ml、2.5μg Fe/ml、5μg Fe/ml,比较3 组MR 信号强度的差异;(5)其它实验条件相同,一组转染后先培养24h,再用含有硫酸铁的完全培养基换液继续培养48h,另一组转染后先培养60h,再用含有硫酸铁的完全培养基换液继续培养12h,比较两组间MR 信号强度的差异,评价铁加入时间对其影响;(6)细胞量(含106 个细胞)、转染质粒量(10μg pcDNA3.0-tyr)等实验条件完全相同,比较GM 细胞、SHG44细胞和T98 细胞间酪氨酸酶活性及MR 信号强度的差异;(7)裸鼠10 只,分两组。实验组(6 只)先pcDNA3.0-tyr 电穿孔法转染SHG44 胶质瘤细胞,经G418 筛选后,接种至裸小鼠右腿上部皮下(50ul,约含2×106个细胞),对照组(4 只)转染pcDNA3.0空载体。接种后第4W 行1.5 T MR 检查。采用小孔径线圈及自行设计的增加信噪比装置,各组实验动物均作轴位、冠状面T1WI 和T2WI。MR 检查后处死,取肿瘤组织进行HE 染色、电镜及免疫组化检查。