论文部分内容阅读
目的:以哈尔滨地区肺炎克雷伯菌临床分离株为研究对象，分析β-内酰胺酶相关基因的分布并评估这些基因对氨基糖苷类抗生素的耐药水平的影响。 方法:选择76株肺炎克雷伯菌临床分离菌株，用K-B纸片法和MIC法分别检测抗生素的耐药性;用PCR法检测肺炎克雷伯菌株中β-内酰胺类抗生素相关基因blaSHV、 blaTEM、 blaCTX-M的分布情况;通过RT-PCR法检测β-内酰胺类基因在不同菌株中的差异表达;通过基因克隆方法构建blaCTX-M基因表达质粒，检测其对抗生素耐药水平的影响。 结果:76株肺炎克雷伯菌中，ESBLs相关基因主要为blaSHV(45/76，59.21％)、blaTEM(27/76，35.53％)和blaCTX-M(38/76，50.00％);携带blaSHV基因菌株对AMK的耐药率(17/45，37.78％)明显高于非携带blaSHV基因菌株(5/31，16.13％)(P＜0.05)。携带blaCTX-M基因的菌株GEN的高水平的耐药率为39.47％(15/38)，而未携带该基因的菌株GEN的高水平耐药率为13.16％(5/38)(p＜0.01);携带blaSHV基因的菌株AMK的高水平耐药率和未携带该基因的菌株的耐药率分别为31.11％(14/45)和6.45％(2/31)(p＜0.05);基因分布与MIC50值的比较结果显示，未携带blaCTX-M基因的阿米卡星和庆大霉素的MIC50值分别为2μg/mL和1μg/mL，128μg/mL;而携带blaCTX-M基因的菌株对阿米卡星和庆大霉素的MIC50值分别为4μg/mL，18μg/mL，16μg/mL，1024μg/mL和16μg/mL，384μg/mL,1024μg/mL。进一步的多因素逻辑回归结果显示，blaCTX-M基因与阿米卡星(OR:5.386，95％CI:1.422，20.403，P=0.013)和庆大霉素(OR:7.385，95％ CI:1.994，27.359，P=0.003)的耐药水平密切相关。RT-PCR的结果显示，AMK和GEN耐药菌株中，blaCTX-M基因mRNA表达阳性菌株分别为90.91％(10/11)和86.67％(13/15)，明显高于敏感株40.00％(4/10)和17.67％(1/6)，具有统计学差异(p＜0.05，p＜0.01)。blaCTX-M质粒表达的大肠埃希菌对阿米卡星和庆大霉素的MIC值分别为256μg/mL和＞1024μg/mL，而对照组分别为＜1μg/mL和＜1μg/mL。 结论:肺炎克雷伯菌β-内酰胺类blaCTX-M基因与氨基糖苷类抗生素阿米卡星和庆大霉素的耐药水平密切相关。