论文部分内容阅读
目的:观察美她司酮对厄洛替尼耐药型非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响,以研究其体内外抗肿瘤药效及其分子机制。方法:采用CCK8法检测厄洛替尼对5种非小细胞肺癌细胞毒性,筛选出厄洛替尼耐药型和敏感型细胞株;进一步观察美她司酮对A549(耐药型)、H1975(耐药型)和H1299(耐药型)细胞增殖抑制作用,筛选出受试细胞以及药物量效-时效关系,并确定美她司酮安全有效的浓度范围;利用普通倒置显微镜法、DAPI染色、PI单染、线粒体膜电位、AnnexinV-FITC/PI双染及Caspase-3活性实验分别检测美她司酮对A549和H1975细胞凋亡形态、细胞增殖及细胞凋亡的影响;构建BALB/C非小细胞肺癌A549皮下移植瘤裸鼠模型,评价美她司酮体内抗肿瘤作用;采用qRT-PCR法、Western blot法及免疫组化法研究美她司酮体内外抗肿瘤作用机制,检测其对细胞增殖和凋亡信号通路相关蛋白的影响。结果:A549、H1975、H1299和H520为厄洛替尼耐药型细胞株,HCC827为厄洛替尼敏感型细胞株;美她司酮呈浓度-时间依赖性的抑制A549、FH1975和H1299细胞增殖;美她司酮呈浓度依赖性诱导细胞凋亡;体内实验结果表明,美她司酮呈剂量依赖性抑制体内肿瘤体积增长,当美她司酮剂量为80mg/kg时,抑瘤率为79.47%;进一步分子机制探讨发现,美她司酮能干扰非小细胞肺癌细胞凋亡信号通路P53/caspase-3,并可有效抑制该信号通路中PARP和PCNA蛋白表达、激活caspase-3、下调Bcl-2和Bax凋亡相关蛋白,上调P53蛋白及其基因。此外,美她司酮还可下调EGFR及其下游信号通路中CyclinDl,内源性EGFR、P-EGFR、P-AKT,PTEN和P-ERK,以及EGF诱导的EGFR和P-EGFR蛋白表达。结论:美她司酮可显著抑制肿瘤细胞增殖、存活并诱导细胞凋亡;其诱导凋亡的机制可能是通过P53依赖性途径,调控PARP、caspase-3、Bcl-2和Bax凋亡蛋白;调控非小细胞肺癌细胞中EGFR/PI3K/PTEN/AKT和EGFR/RAF/ERK信号通路,从而干预非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡,抑制肿瘤的形成。