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肿瘤抑制因子P53在抑制肿瘤细胞恶性增殖及维持基因组稳定性方面发挥重要作用。大部分癌症的发生与P53功能的缺失密切相关。在不同的胁迫刺激下,P53能选择性地诱导细胞生长抑制或凋亡:当细胞遭受轻微损伤时,将细胞周期阻滞于G1期,抑制受损DNA的继续复制,使损伤细胞得以修复:或者在某些情况下促进细胞凋亡,消除严重受损的细胞,保护基因组稳定,防止癌症发生。
微小染色体维持蛋白(minichromosome maintenance,MCM)是一组存在于古细菌及真核生物中,对基因组的复制起重要作用的保守蛋白。其中,Mcm2-7在生物体中以六聚体DNA解旋酶的形式存在,参与DNA复制的起始及延伸过程。然而,Mcm蛋白在细胞中的表达量远远超出了DNA复制的需求,暗示了Mcm蛋白可能还存在一些其他功能。
据报道,许多肿瘤中都出现了Mcm7的过表达。为了探究Mcm7在细胞癌变过程中扮演的重要角色,我们通过一系列的实验,检测Mcm7是否影响肿瘤抑制因子P53的功能。我们发现,Mcm7是一个新的P53结合蛋白。我们在体内及体外条件下,均证实了Mcm7与P53的结合。通过GST-pull-down实验,我们发现P53的C末端结构域介导了与Mcm7的相互作用。
我们运用荧光素酶报告基因实验,分析了Mcm7对P53转录活性的影响。在H1299细胞中,我们发现过表达Mcm7会抑制P53介导的基因转录。在A549及U2OS细胞中,我们也得到了类似的结果。有趣的是,在Hela细胞中我们用sh RNA技术干扰Mcm7的表达后,P53的半衰期从20 min延长至40 min。然而,在A549及U2OS细胞中,Mcm7蛋白水平的变化并不影响P53蛋白稳定性。为了进一步研究在U2OS细胞中Mcm7抑制P53转录活性的机制,我们在U2OS细胞中共表达GFP-Mcm7及RFP-P53,发现了Mcm7与P53共定位于细胞质中。
我们的研究发现Mcm7是一个新的P53作用蛋白。Mcm7能够结合P53,并抑制P53介导的基因转录。Mcm7与P53在细胞质中的共定位,暗示了Mcm7可能通过结合P53,将P53束缚在细胞质中,P53无法进入细胞核从事基因转录,从而间接的使P53失活,促进癌细胞的增殖。