EGF与CNTF基因共转染对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响及机制探讨

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目的研究表皮生长因子(Epidermal growth factor, EGF)与睫状神经营养因子(Ciliary neurotrophic factor, CNTF)基因共转染对脊髓损伤大鼠运动功能恢复以及促进反应性星形胶质细胞逆分化的作用,并探讨其机制。方法4月龄SPF级SD大鼠共96只,体重约230g,雌雄不限,将其随机平均分为EGF转染组(A组),CNTF转染组(B组),CNTF与EGF共转染组(C组)和对照组(D组)4组,每组24只。采用改良Allen’s法制备大鼠脊髓损伤模型,后应用Alzet微渗透压泵分别向A、B、C组和D组持续转染重组EGF与CNTF质粒和空白质粒各5μg(A组单独EGF转染,B组单独CNTF转染,C组EGF与CNTF共转染,D组为空白质粒)。在术后1、2、4、6周采用BBB运动功能评分系统,斜板运动试验检测大鼠运动功能恢复情况;采用RT-PCR和Western blot方法检测EGF与CNTF基因的表达;采用免疫荧光双标染色和组织学观察EGF与CNTF对反应性星形胶质细胞增殖分化的影响以及脊髓组织病理变化情况。结果术后2、4、6周运动功能评分C组BBB评分明显高于其余三组,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR和Western blot方法检测显示A组大鼠脊髓组织可见EGF,B组可见CNTF mRNA与蛋白的表达,C组可见共同表达,而D组则未见明显表达。组织学观察示C组脊髓结构以及神经元形态恢复较好且逐渐趋于正常,且免疫荧光双标染色示C组脊髓组织中Nestin阳性的星形胶质细胞数较对照组明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论EGF与CNTF基因能够促进脊髓损伤后星形胶质细胞逆分化,并具有协同作用,从而促进脊髓功能的修复。
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