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β-葡萄糖苷酶(β-D-glucoβyranoside glucohydrolases,E.C.3.2.1.21)能够特异性催化水解小分子寡糖、烃基以及芳香基团非还原性末端β-糖苷键生成葡萄糖,其作为纤维素酶的组分中主要的限速酶,对高效利用生物质碳源有着重要意义。除此之外其在食品加工、养殖、生物医学、种植等领域都有着重要使用价值,因此新型β-葡萄糖苷酶资源的开发具有深远的生产意义。本试验旨在通过从海南红树林环境中筛选出新型β-葡萄糖苷酶基因并通过研究其酶特性挖掘该酶资源的应用潜力。主要研究结果如下:1.红树林土壤中产β-葡萄糖苷酶真菌的筛选、分离及鉴定试验采用七叶素苷平板法从海南红树林土壤中成功筛选出9株具有明显β-葡萄糖苷酶活性的真菌,并选取其中一株活性较高真菌H1进行后续实验,该菌在微晶纤维素诱导下,发酵液上清中酶活达到了 19.1 U/ml;菌株H1经过形态学观察和ITS序列测序鉴定属于哈茨木霉(Trichoderma harzianum)。2.哈茨木霉bgl基因的克隆及在其在毕赤酵母中的表达以NCBI数据库中哈茨木霉IOC 3844的bgl基因(GenBank登录号为:KU201604.1)为模板设计引物,利用反转录PCR从野生菌株H1中扩增得到完整的bgl基因,以pPICZαA为表达载体将H1 bgl基因转入毕赤酵母X33表达并测定最佳产酶周期,结果表明,H1 bgl片段全长1398 bp,经比对与数据库中哈茨木霉IOC 3844β-葡萄糖苷酶同源性最高,达到96.07%,没有发现100%一致率的序列。产酶实验测定最佳发酵周期为6d,最高活性为3.09 U/ml。3.哈茨木霉H1 bgl1蛋白的分离纯化及其酶特性研究试验通过阴离子交层析成功纯化H1bgl蛋白,并用SDS-PAGE和BCA法分别检测蛋白纯度和浓度,最后以pNPG为底物分别测定不同温度和pH下H1bglβ-葡萄糖苷酶活性及酶反应动力参数,结果表明,纯化后酶液蛋白浓度为0.106 mg/ml,酶蛋白比活力为14 U/mg,SDS-PAGE检测无明显杂带,分子量约80kD。最佳反应pH为7.0,温度为55℃,米氏常数Km=1.47 mM、专一性常数Kcat/Km=13.56(/s/mM)。综上所述,试验成功从红树林哈茨木霉中发现了一种新型β-葡萄苷酶资源,该酶具有优秀的碱性环境适应性,但其催化效率相对较弱,有待于进一步改造提升。