5-HT2A、5-HT7受体和甘丙肽在大鼠脊髓Onuf核分布的研究

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目的:研究5-HT2A、5-HT7受体和甘丙肽(galanin,GAL)在雄性大鼠脊髓Onuf核不同运动神经元内分布及其与泌尿生殖反射中枢调控的关系。方法:成年SD大鼠24只(雄性22只、雌性2只),随机分为性别对照组(n=6,雄性4只,雌性2只)、HRP组(n=6)和PRV(n=12)组。性别对照组取脊髓L5-6节段,切片后分别作5-HT2A、5-HT7受体和GAL免疫组化染色;HRP组用HRP分别注入右侧尿道外括约肌(HRP-EUS组;n=3)或右侧坐骨海绵体肌(HRP-IC组;n=3),24h后取L5-6节段,切片后经TMB法染色,再结合5-HT2A或5-HT7受体免疫组化染色,光镜和电镜下观察5-HT2A、5-HT7受体在Onuf核的分布情况。PRV组用重组伪狂犬病毒株(PRV-152)分别注入右侧尿道外括约肌(PRV-EUS组; n=6)或右侧坐骨海绵体肌(PRV-IC组; n=6),4d后取L5-6节段,切片后分别作5-HT2A或5-HT7受体或GAL双标记荧光免疫组化染色。荧光显微镜或者激光共聚焦显微镜下观察5-HT2A、5-HT7受体和GAL在Onuf核的分布情况。结果:性别对照组见雄性大鼠5-HT2A、5-HT7受体和GAL在Onuf核的免疫表达明显强于雌性大鼠;5-HT2A受体的免疫产物主要位于Onuf核背外侧核(dorsolateral nucleus, DLN)的内侧,5-HT7受体则主要位于DLN的外侧,GAL在DLN内、外侧均有明显的免疫反应活性表达。HRP-IC组显示过氧化物酶标记的运动神经元位于同侧DLN的内侧,在相同区域有5-HT2A受体免疫活性表达;HRP-EUS组见HRP逆行示踪标记的EUS运动神经元位于同侧DLN的外侧, 5-HT7受体免疫反应活性与HRP标记的运动神经元重叠。电镜下可见DLN运动神经元内HRP酶反应产物呈针状结晶,大多数5-HT2A受体的免疫标记主要位于IC运动神经元细质膜,其周围树突质膜上也可查见受体分布。而5-HT7受体免疫产物主要分布在EUS运动神经元胞浆内线粒体、内质网和Golgi复合体内。PRV组见PRV-152经IC逆行示踪标记的运动神经元主要位于同侧DLN的背内侧,经EUS逆行示踪标记的运动神经元位于同侧DLN的腹外侧;免疫荧光双标记显示5-HT2A受体的免疫标记主要分布于支配IC的运动神经元胞体和突起周围,5-HT7受体主要位于支配EUS的运动神经元内,GAL的免疫标记位于EUS和IC的运动神经元内。结论: 5-HT2A、5-HT7受体不均匀分布在Onuf核支配不同的盆底横纹肌的运动神经元;5-HT2A受体主要分布于支配IC的运动神经元,可能主要参与性反射的调节,5-HT7受体主要分布于支配EUS的运动神经元,可能主要参与泌尿反射的调控。GAL在背外侧核内、外侧均有明显的免疫活性表达,涉及支配EUS和IC的运动神经元,可能参与泌尿反射和性反射的调控。
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