【摘 要】
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目的: 培养扩增脐血(Umbilical cord blood,UCB)间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs);探索脐血间充质干细胞分化为肝细胞,胰岛细胞的条件;观察体外诱导的胰岛样细胞能否在1型
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目的: 培养扩增脐血(Umbilical cord blood,UCB)间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs);探索脐血间充质干细胞分化为肝细胞,胰岛细胞的条件;观察体外诱导的胰岛样细胞能否在1型糖尿病小鼠模型体内发挥降糖作用。 材料方法: 1.羟乙基淀粉沉淀法分离脐血中的有核细胞,以MesencultTM培养基(含10%的生长添加物)培养。 2.流式细胞仪检测细胞表面抗原,测定细胞周期。 3.DMEM/F12+10%FBS+1μmol/L地塞米松+5U/ml胰岛素,向脂肪细胞诱导,0.375%油红O染色法,观察诱导后细胞浆中的脂滴。 4.DMEM/F12+10%FBS+0.1μmol/L地塞米松+10mmol/L B-磷酸甘油+50μmol/L维生素C向成骨细胞诱导,碱性磷酸酶(钙—钴法)和钙沉积(von Kossa法)判断诱导的细胞是否具有成骨细胞的特征。 5.DMEM/F12+0.5μmol/L地塞米松+10ng/ml HGF(Hepatocyte growth factor,HGF)+10ng/ml EGF(Epidermal growth factor,EGF)+1×ITS(Insulin-transferrin-selenium,ITS)诱导2周,DMEM/F12+0.5μmol/L地塞米松+10ng/ml HGF+10ng/ml Oncostatin M+1×ITS继续诱导2周,向肝细胞诱导分化。 6.向胰岛细胞诱导 方案一:H-DMEM含5%FBS持续诱导;方案二:DMEM/F12(不含FBS)添加10ng/ml EGF、1mmol/L B-巯基乙醇诱导7d,含5%FBS的H-DMEM继续诱导;方案三:DMEM/F12(不含FBS)添加10ng/ml EGF、1mmol/L B-巯基乙醇诱导7d,H-DMEM培养基添加3ng/ml Activin A和10ng/ml HGF继续诱导。
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