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目的: 1.观察尘螨抗原(Der p)对P815细胞Toll样受体9(TLR9)、TLR4及其下游通路胞外信号调节激酶(ERK1/2)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的作用，以及对白介素4(IL-4)、IL-13、IL-10、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)分泌的影响，探讨Der p对肥大细胞(MCs)的直接作用及其作用机理。 2.观察CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)及脂多糖(LPS)对Der p直接作用P815细胞后TLR4、TLR9、ERK1/2、PI3K表达及IL-4、IL-10分泌的影响，探讨CpG ODN及LPS对MCs的免疫调节机制。 方法: 1.尘螨抗原直接作用P815细胞:将P815细胞接种至6cm培养皿中，经24h培养后改用无血清的培养基继续培养5h，根据尘螨抗原浓度不同分成空白对照组（a组）、Der p0.001μg/ml(b组)、Der p0.01μg/ml(c组)、Der p0.1μg/ml(d组)，分别培养12h及24h。免疫印迹(WB)法检测各组TLR9蛋白表达及ERK1/2磷酸化水平1。酶联免疫吸附法(ELISA)检测12h后各组细胞悬液上清液中IL-4、IL-10、IL-13及TSLP的表达情况。 2.CpG ODN、LPS单独或联合尘螨抗原直接作用P815细胞:将P815细胞接种至6cm培养皿中，经24h培养后改用无血清的培养基继续培养5h，分成6组:空白对照组（A组），Der p0.01μg/ml组（B组），CpG ODN0.5μg/ml(C组),Der p0.01μg/ml+CpG ODN0.5μg/ml(D组),LPS10μg/ml(E组)，Der p0.01μg/ml+LPS10μg/ml(F组)，培养12h后，WB法检测TLR9、TLR4的蛋白表达及ERK1/2与PI3K的磷酸化水平2，ELISA法检测各组细胞上清液中IL-10、IL-4的表达情况。 结果: 1.尘螨抗原直接作用P815细胞 1.1不同浓度Derp作用P815细胞12h及24h后TLR9的蛋白表达变化 不同浓度Der p(0μg/ml、0.001μg/ml、0.01μg/ml、0.1μg/ml)直接作用P815细胞12h及24h后 WB结果示:与空白对照组比较，Der p作用12h后，0.01μg/ml组和0.1μg/ml组细胞TLR9蛋白表达显著下降（P均＜0.01），0.001μg/ml组表达无统计学差异（P＞0.05）;与空白对照组比较，Der p作用24h后，0.001μg/ml、0.01μg/ml、0.1μg/ml组TLR9蛋白表达均显著下降（P均＜0.01），组间无明显浓度依赖性;相同浓度下，作用24h组比作用12h组的TLR9蛋白表达显著降低（P均＜0.01）。 1.2不同浓度Der p作用P815细胞12h及24h后通路ERK1/2的磷酸化水平变化 WB结果示:与空白对照组比较，Der p作用12h后，0.01μg/ml组和0.1μg/ml组细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平均显著升高(p＜0.05或p＜0.01)，0.001μg/ml组无显著改变(P＞0.05);与空白对照组比较，Der p作用24h后，0.001μg/ml、0.01μg/ml和0.1μμg/ml组细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平均显著升高(p均＜0.01），组间无明显浓度依赖性;当Der p浓度同为0.001μg/ml或0.01μg/ml时，作用24h组比作用12h组细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平显著升高（P均＜0.01）。 1.3不同浓度Der p作用P815细胞12h后上清中IL-4、IL-10、IL-13及TSLP的释放水平。 ELISA结果示:与空白对照组比较，0.001 g/ml组和0.01μg/ml组上清中IL-4表达显著升高(p＜0.05或p＜0.01)，IL-10则显著降低(p＜0.05或p＜0.01)，但0.1μg/ml组IL-4及IL-10均无显著改变(p＞0.05），而0.001μg/ml、0.01μg/ml及0.1μg/ml组上清中IL-13及TSLP表达均显著升高(p＜0.05），且IL-13各组间呈浓度依赖性，TSLP无明显浓度依赖性。 2.CpG ODN、LPS对尘螨抗原直接作用P815细胞的干预和影响 分成6组，分别为空白对照组（A组），Der p0.01μg/ml组（B组），CpG ODN0.5μg/ml(C组),Der p0.01μg/ml+CpG ODN0.5μg/ml(D组),LPS10μg/ml(E组), Der p0.01μg/ml+LPS10μg/ml(F组)。 2.1 CpG ODN、LPS单独或联合Der p作用P815细胞12h后TLR9和TLR4的蛋白表达变化 WB结果示:与空白对照组比较，B组TLR9蛋白表达显著下降(p＜0.01)，TLR4蛋白表达无显著变化(p＞0.05)，C组TLR9蛋白表达显著升高(p＜0.05），TLR4蛋白表达显著下降(p＜0.05），E组TLR9、TLR4蛋白表达均无显著改变(p均＞0.05）;与B组比较，D组TLR9蛋白表达显著升高(p＜0.01)，但TLR4蛋白表达无显著变化(p＞0.05），F组TLR9、TLR4蛋白表达均无显著差异(p均＞0.05）。 2.2 CpG ODN、LPS单独或联合Der p作用P815细胞12h后通路ERK1/2和PI3K的磷酸化水平变化 WB结果示:与空白对照组比较，B、E、F组ERK1/2与PI3K磷酸化水平均显著升高(p均＜0.01），C、D组ERK1/2磷酸化水平无显著改变(p均＞0.05)，但D组PI3K磷酸化水平显著升高(p＜0.01);与B组比，D组ERK1/2磷酸化水平显著降低(p＜0.01)，F组ERK1/2磷酸化水平显著升高(p＜0.01），但D、F组PI3K磷酸化水平无显著差异(p均＞0.05）。 2.3 CpG ODN、LPS单独或联合Der p作用P815细胞12h后上清中IL-4及IL-10的释放水平 ELISA结果示:与空白对照组比较，B、E组细胞上清液中IL-4表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01)，而IL-10表达显著下降(p均＜0.05），C组IL-4表达显著下降(p＜0.05），但IL-10表达无显著改变（p＞0.05）;和B组相比，D组与F组表达无论IL-4还是IL-10的表达均无显著差异(p均＞0.05)。 结论: 1.尘螨抗原可经非IgE介导途径直接激活P815细胞，下调TLR9蛋白表达，并能通过ERK1/2和PI3K信号通路的活化，引起IL-4、IL-13、TSLP分泌增加，IL-10分泌减少，从而促进炎症及过敏反应的发生与发展，但对TLR4的影响不大。 2.LPS可经ERK1/2及PI3K信号通路引起P815细胞IL-4分泌增加，IL-10分泌减少，从而诱发炎症反应。 3.LPS可增加尘螨抗原引起的肥大细胞ERK1/2信号通路活化，但对TLR9、TLR4受体的变化及IL-4、IL-10的分泌并无显著影响。 4.CpG ODN可上调P815细胞TLR9受体表达，降低IL-4的释放，从而稳定肥大细胞，发挥抗炎作用。 5.CpG ODN对尘螨刺激肥大细胞的免疫调节机制可能是通过抑制TLR9的下降及ERK1/2信号通路的活化，但对其引起的PI3K信号通路激活及IL-4及IL-10的分泌效果并不显著。