鸭、鹅、鸸鹋生长素前体cDNA克隆、定位、组织表达及分子进化研究

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:k1165445191
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ghrelin是促生长激素分泌受体的天然配体,全长28个氨基酸残基的多肽。具有刺激垂体生长激素分泌的重要作用,其第3位丝氨酸残基为辛酰基化修饰,其前体preproghrelin为全长117个氨基酸残基的多肽。根据鸡preproghrelin的cDNA序列(dEST accession no.AB075215,836bp)设计引物,以鸭、鹅、鸸鹋腺胃cDNA为模板,通过RT-PCR及3′-RACE的方法,将各个产物经过回收,再经连接转化,克隆测序,拼接后得到鸭、鹅、鸸鹋preproghrelin基因的cDNA序列及ghrelin的cDNA序列,并由此推测出preproghrelin及ghrelin的氨基酸序列。系统进化分析表明,鸭preproghrelin氨基酸序列与鹅preproghrelin的氨基酸序列最先聚类合并,在进化上显示靠得最近,然后与鸸鹋,鸡和火鸡preproghrelin氨基酸序列聚类合并,接着与牛蛙、各种鱼类聚合,然后再与牛、羊等聚合。符合按照形态特征进行判定的系统进化关系。 根据鸡preproghrelin的基因组序列(accession no AY303688.)设计引物,通过筛选实验室已有的丝毛乌骨鸡BAC文库,继而得到含鸡preproghrelin的BAC克隆,将其作为探针进行标记,用FISH方法将鸡的preproghrelin定位在GGA2q.1.1。 根据鸡GAPDH的cDNA序列(dEST accession no.K01458,1284bp)设计引物,以其PCR产物作为内标,分别以鸸鹋各个组织反转录产物为模板,通过多重PCR的检测ghrelin的mRNA在鸸鹋的各个组织中表达情况,结果发现ghrelin的mRNA在鸸鹋ghrelin的mRNA除在腺胃特异表达外,在肺、肌肉、回肠、十二指肠、纹状体、小脑、脑干、肌胃也有少量表达。
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