目的:作为一种添加剂类阻燃剂,四溴双酚A被广泛应用在消费产品中,主要是塑料、纺织品和电子/电气产品。而溴化有机污染物具备持久性有机污染物特征,具有高稳定性和生物蓄积性,因此经常在土壤、水、沉积物和空气等环境基质和生物体中被检测到,对环境和生物健康产生长期而严重的危害。2016年,国际癌症研究机构（International Agency for Research on Cancer,IARC）已将TBBPA列为可能的2A级致癌物,并指出癌症中与TBBPA相关性最显著的是子宫内膜癌。然而,目前关于TBBPA诱导子宫内膜癌发展恶化的肿瘤机制仍旧缺乏。本文主要探讨低浓度TBBPA暴露对子宫内膜癌细胞恶性增殖的毒性作用及潜在机制,这将有助于评估环境浓度TBPPA对子宫的致癌风险。方法:为了探讨环境浓度(10-12-10-5mol/L)TBBPA对子宫内膜癌细胞增殖能力的影响,本实验采用了Alamar Blue和集落形成实验检测TBBPA对Ishikawa细胞活性的影响。随后我们对TBBPA促进子宫内膜癌细胞恶性增殖的分子机制进行了深入探究。首先,实验探讨了TBBPA对泛素-蛋白酶体途径的影响。通过采用ELISA法测定泛素修饰过程所需要的介导酶（UBAE1、UBAE2和UBAE3）的蛋白表达。随后,采用Western blot方法检测不同浓度TBBPA处理后的IκB和NF-κB蛋白表达,使用Co-IP法检测IκB和Ub两种蛋白质的相互作用,确定TBBPA暴露对泛素-蛋白酶体途径以及IκB/NF-κB通路的影响。采用qRT-PCR和ELISA方法检测Ishikawa细胞中炎性细胞因子的水平,评估TBBPA暴露对NF-κB通路下游炎症因子表达的影响。同时,实验中应用蛋白酶体抑制剂MG-132来验证泛素-蛋白酶体途径在TBBPA暴露诱导的IκB降解以及后续炎症反应和肿瘤恶性增殖中的关键作用。另外,利用子宫内膜癌裸鼠成瘤模型探究环境浓度TBBPA暴露对裸鼠体重以及子宫内膜癌肿瘤生长的影响。采用免疫组化和Western blot方法检测低剂量TBBPA暴露对裸鼠子宫内膜癌肿瘤组织泛素-蛋白酶体途径和NF-κB通路的影响。结果:Alamar Blue实验结果显示,与对照组相比,TBBPA暴露4天后,Ishikawa细胞存活率呈倒U型。其中,当TBBPA浓度为10-11-10-8mol/L时,细胞活性以剂量和时间依赖的方式增加。而10-7-10-5mol/L的TBBPA对细胞增殖呈现抑制作用。集落形成实验与Alamar Blue实验结果一致,表明低浓度TBBPA暴露以剂量依赖的方式促进Ishikawa细胞增殖。ELISA结果显示,浓度为10-11-10-8mol/L的TBBPA处理Ishikawa细胞后,UBAE1、UBAE2和UBAE3的蛋白表达呈剂量和时间依赖性增加。与对照组相比增加最明显是当TBBPA暴露浓度为10-8mol/L时,此时UBAE1、UBAE2和UBAE3的蛋白表达分别增加约1.28、1.85和3.53倍,这些结果表明,环境浓度TBBPA暴露可以激活子宫内膜癌细胞中的泛素-蛋白酶体途径。Western blot方法结果显示,与对照组相比,浓度为10-12、10-10和10-8mol/L的TBBPA暴露于细胞后,IκB的蛋白表达水平分别降低约100%、53%和22%。然而,TBBPA暴露后NF-κB的水平呈现相反的趋势。另外,Co-IP方法的结果显示,与对照组相比,当TBBPA浓度为10-10mol/L时可使IκB泛素化水平增加2.03倍。在10-8mol/L浓度下,TBBPA暴露使IκB泛素化明显升高2.87倍。这些结果表明低浓度的TBBPA暴露可以通过增强泛素化蛋白酶体介导的IκB泛素化促进NF-κB通路的激活。qRT-PCR和ELISA实验的结果显示,与对照组相比,当TBBPA浓度为10-8mol/L时,IL-6、IL-1β和TNF-α的m RNA表达量分别增加约0.90、0.74和0.94倍。同样,TBBPA暴露组中能观察到IL-6,IL-1β和TNF-α的蛋白质表达呈浓度依赖性显著增加,这一结果证明了TBBPA暴露能促进NF-κB通路下游炎症反应的发生。然而,TBBPA诱导的Ishikawa细胞增殖以及分子反应会在共同暴露蛋白酶抑制剂MG-132后受到抑制,进一步证实了泛素蛋白酶体途径在TBBPA诱导Ishikawa细胞增殖中的关键作用。利用子宫内膜癌裸鼠成瘤模型验证了体外细胞实验的结果。研究表明,TBBPA暴露增加了裸鼠子宫内膜癌肿瘤的生长,引起小鼠体重下降。TBBPA暴露能激活裸鼠子宫内膜癌肿瘤泛素-蛋白酶体通路,进而促进NF-κB通路的激活。结论:综上所述,环境浓度TBBPA通过泛素-蛋白酶体途径介导的IκB降解促进了子宫内膜癌细胞的增殖。我们的数据为全面评估TBBPA暴露对子宫内膜癌风险的影响提供了重要依据。