蔓荆子总黄酮及紫花牡荆素对肺癌A549细胞生长和凋亡的影响

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目的:检定蔓荆子总黄酮(FVTF, Fructus Viticis total flavonoids)及其活性成分紫花牡荆素(CAS, casticin)对人肺癌A549细胞生长抑制作用和诱导细胞凋亡作用;探讨FVTF及CAS诱导A549细胞生长抑制和凋亡的机制是否涉及下调叉头盒转录因子M1(FoxM1)蛋白表达。方法:分别用不同浓度CAS及FVTF处理体外培养的A549细胞,平皿集落形成法测定CAS及FVTF对A549细胞生长的抑制率;AO/EB荧光染色观察细胞凋亡形态;碘化丙啶(PI, propidium lodide)染色流式细胞术(FCM, flow cytometry)检测细胞凋亡率及细胞周期;Western Blot检测FoxM1蛋白表达水平。结果:①平皿集落形成法测定0.3、1、3、10、15、30μmol/L的CAS组与3μg/ml的DDP组,A549细胞的集落抑制率分别为2.06±0.38%、19.51±2.61%、46.15±5.12%、58.16±7.76%、65.67±3.11%、71.86±2.90%和73.55±2.89%,呈浓度依赖性,IC50为7.26μmol/L,与溶媒对照组对比(P<0.05);②AO/EB染色荧光显微镜下观察10、30μmol/L的CAS组与3μg/ml的DDP组,可见A549细胞呈典型凋亡细胞形态学改变;③PI染色流式细胞术测得溶媒对照组、3、10、30μmol/L的CAS组与3μg/ml的DDP组的细胞凋亡率分别为1.81±0.91%、3.26±2.08%、5.27±4.29%、10.64±5.40%及23.13±6.91%,呈浓度依赖性,10、30μmol/L的CAS组与溶媒对照组对比,差异有统计学意义(P<0.05);④Western Blot检测出CAS下调A549细胞FoxM1蛋白表达,呈浓度和时间依赖性,与溶媒对照组对比,差异有统计学意义(P<0.05)。⑤平皿集落形成法测定1、5、10、20、30、40μg/ml的FVTF组与3μg/ml的DDP组,集落抑制率分别为3.72±0.39%、27.00±3.74%、40.41±1.72%、53.63±2.38%、67.78±3.23%、71.86±2.28%和72.25±2.33%,呈浓度依赖性,IC50为16.02μg/ml,与溶媒对照组对比(P<0.05);⑥AO/EB染色荧光显微镜下观察20、40μg/ml的FVTF组与3μg/ml的DDP组,可见A549细胞呈典型凋亡细胞形态学改变;⑦PI染色流式细胞术测得溶媒对照组、10、20、40μg/ml的FVTF组与3μg/ml的DDP组细胞凋亡率分别为1.81±0.91%、4.35±0.91%、6.74±0.57%、8.67±0.58%及23.13±6.91%,呈浓度依赖性,20、40μg/ml FVTF组与溶媒对照组对比,差异有统计学意义(P<0.05);⑧Western Blot结果表明经FVTF处理的A549细胞FoxM1蛋白表达未见明显变化。结论:1、紫花牡荆素具有抑制人肺癌A549细胞生长和诱导细胞凋亡的作用,呈浓度依赖性。2、紫花牡荆素诱导人肺癌A549细胞生长抑制和凋亡的作用机制涉及下调细胞FoxM1蛋白的表达,呈浓度和时间依赖性。3、蔓荆子总黄酮具有抑制A549细胞生长和诱导细胞凋亡的作用,呈浓度依赖性。4、蔓荆子总黄酮诱导生长抑制和A549细胞凋亡的作用机制与FoxM1蛋白表达无关。
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