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【研究背景】胰腺癌具有诊断十分困难、早期易出现转移和对放化疗不敏感等特点。该肿瘤预后极差,一旦诊断其手术切除机会仅10%～15%,总体术后5年生存率1%-4%左右,因此寻找切实可行的诊治方法对胰腺癌诊治尤为重要。内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)又称PK1(Prok1)是新近发现的AVIT蛋白家族成员之一。研究发现EG-VEGF可促进血管生成,在肾上腺血管内皮细胞的研究中发现其可促进内皮细胞增殖、迁移和增加内皮细胞的通透性。EG-VEGF广泛分布于哺乳动物的类固醇组织,与G蛋白偶联受体PKR1和PKR2相偶联,受体被激活而激活钙动员,进一步激活MAPK和PI3K信号通路。EG-VEGF在神经系统、免疫系统以及肿瘤组织中可作为重要的生长因子调控细胞增殖、凋亡和血管形成等多种生物学功能。【目的】探讨EG-VEGF在胰腺癌细胞中的调控作用与分子机制。【方法】1.采用免疫组化技术检测EG-VEGF及其受体PKR1在正常胰腺和胰腺癌组织中的表达及临床病理的相关性;2.应用Western-Blot方法在人胰了解胰腺癌高转移细胞系Mia PaCaⅡ中EG-VEGF和受体PKR1的表达;3.通过MTT检测EG-VEGF对胰腺癌细胞增殖情况的评价;4.借助划痕实验和TransWell小室观察EG-VEGF对胰腺癌细胞迁移能力的影响;5.流式细胞仪技术检测EG-VEGF对胰腺癌细胞凋亡的影响;6.采用Western blot方法检测EG-VEGF对胰腺癌细胞信号转导通路的调控。【结果】1.在MiaPaCaⅡ细胞系中,利用Western Blot方法检测到EG-VEGF和受体PKR1的表达。2.EG-VEGF在胰腺癌组织中显示阳性表达率较高,在正常胰腺组织中低或无表达,两者相比具有统计学差异(P=4.167E-08, P < 0.05),统计学分析显示其表达程度与胰腺癌的分期具有线性正相关性(P=0.0299, P < 0.05)。PKR1在胰腺癌组织中有阳性表达,在正常胰腺中低或无表达,同正常胰腺组织相比,两者间的阳性表达具有统计学差异P=2.095E-06, P < 0.05,但与胰腺癌的分级(P=0.8522, P > 0.05)和分期无相关性(P=0.1606, P > 0.05)。同时也发现,在正常人胰岛中有EG-VEGF以及受体PKR1的阳性表达。3.在EG-VEGF 100ng/ml的条件下可明显促进胰腺癌细胞的增殖(P<0.05);4.采用划痕试验观察培养上清中加入100 ng/ml的EG-VEGF时可明显促进胰腺癌细胞MiaPaCaⅡ细胞迁移(79±5.43%),而培养上清中无EG-VEGF时其迁移率为39±2.65%(P<0.05)。采用Trans Well实验观察到小室中加入不同浓度的EG-VEGF,其迁移细胞数分别为12±3.5、52±9.5、70±10.4、90±12.6,组间具有统计学差异(p<0.05),随着EG-VEGF浓度的增高,其迁移能力逐渐增强。5.当EG-VEGF在100 ng/ml时细胞的凋亡率为13.21±4.65%,而对造组凋亡率为27.74±3.45%,P<0.05。6.在胰腺癌细胞中EG-VEGF可激活Ras-ERK、JAK-STAT3和PI3K-AKT信号通路,并促进抗凋亡蛋白Mcl-1的上调,进一步研究发现该效应可被特定信号通路阻断剂部分阻断。进一步说明EG-VEGF调控胰腺癌细胞凋亡的分子机制。【结论】1.EG-VEGF可调控胰腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡。2.EG-VEGF调控胰腺癌细胞凋亡是通过其激活下游信号通路,进一步上调抗凋亡蛋白Mcl-1而发挥其抗凋亡的作用。3.统计分析提示,与正常胰腺组织相比,EG-VEGF在胰腺癌组织中阳性表达率较高,并与胰腺癌的分期具有线性相关性,提示其在肿瘤的诊断和治疗中具有较好的应用前景。