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研究背景目前,尽管急性淋巴细胞白血病(Acute lymphoblastic leukemia；ALL)的预后得到很大的改善。然而,由于化疗耐药因素的存在导致许多患者难以获得缓解或最终复发。近来,随着对肿瘤干细胞(cancer stem cell;CSC)研究的深入,越来越多的研究认为肿瘤的复发和转移,其罪魁祸首是由于CSC的存在,而人们在进行“CSC”生物学特性研究中发现,多药耐药性是CSC的重要特性之一。而耐药的ALL细胞中是否同样存在CSC?本研究中应用治疗ALL的常用化疗药物门冬酰胺酶(L-asparaginase;L-asp)诱导T-ALL细胞Jurkat对其耐药,建立耐药细胞系。应用实时定量PCR法、流式细胞学法检测耐药ALL细胞系的CSC相关基因的表达情况、细胞表面抗体表达变化情况、侧群细胞(side population；SP)含量,进一步研究耐药ALL细胞系的生物学特性,进而了解ALL多药耐药的机制以及多药耐药和CSC之间的关系,从而为白血病的靶向治疗和耐药逆转等提供实验依据。目的探讨耐门冬酰胺酶的急性T淋巴细胞白血病细胞的生物学特性。方法1.本实验以人T-ALL细胞株Jurkat为亲本细胞,经过L-asp逐步增量诱导Jurkat细胞耐药,建立耐L-asp的急性T淋巴细胞白血病细胞株。观察其形态学特征及生长特性,MTT比色法分析耐药细胞系的耐药图谱和耐药指数。2.分别收集Jurkat和耐L-asp的Jurkat细胞,用流式细胞学方法检测析。Jurkat细胞耐药前后的细胞膜表面标志的变化情况。3. Jurkat和耐药Jurkat细胞Hoechst33342染色后,对比维拉帕米抑制试验,应用流式细胞学法检测SP细胞含量。4.用实时定量PCR法分析Jurkat细胞和Jurkat/L-asp细胞中ABCG2、Sox-2、Oct-4、Nanog基因的表达情况。结果1.成功建立了能够在0.5u/ml的L-asp培养液中稳定生长的耐药细胞株,命名为Jurkat/L-asp。2.MTT比色法分析了其耐药图谱,结果显示：Jurkat/L-asp对柔红霉素、依托泊苷、甲氨蝶呤、阿糖胞苷耐药指数是Jurkat的15.5、9.59、4.28、4.98倍。3.实时定量PCR扩增结果显示人急性淋巴细胞白血病细胞系Jurkat/L-asp较Jurkat细胞高表达ABCG2、Sox-2基因,前者较后者有显著的统计学意义(P<0.05)。而Oct-4、Nanog基因在Jurkat/L-asp细胞和Jurkat细胞中的表达无明显统计学意义(P>0.05)4. Jurkat/L-asp细胞较Jurkat细胞高表达CD34和CD13,前者较后者有显著的统计学意义(P<0.05)。对数生长期的耐药T-ALL细胞系Jurkat/L-asp细胞用Hoechst33342染色,对比维拉帕米抑制试验,在流式细胞仪上检测两种细胞系的SP细胞量的变化,Jurkat/L-asp细胞中存在SP细胞占0.4%,Jurkat细胞中SP细胞含量为0%。结论1.耐门冬酰胺酶急性T淋巴细胞白血病细胞为多药耐药细胞。2.耐门冬酰胺酶急性T淋巴细胞白血病细胞具有一定的肿瘤干细胞的特性。