目前有希望的一类叫腺病毒介导癌细胞裂解疗法,不论肿瘤细胞中有多少种癌基因参与,也不论肿瘤细胞处于何阶段,都将它们感染、裂解杀死.此外,它还有一个最大的特点就是具有级联放大效应,即利用肿瘤细胞进行病毒自我复制,成万倍地扩增.针对目前所有基因转染技术中最为关键的转染效率低的问题,这一特点具有重要意义.腺病毒不仅能感染和裂解增殖活跃的细胞,也能感染和裂解静息期（G<,0>/G<,1>)细胞,因此它对大多数实体瘤的治疗更具优势.构建选择复制性腺病毒的策略主要有三个,一是删除在肿瘤细胞中复制时多余而在正常细胞中复制不可缺少的病毒基因;二是用肿瘤特异的启动子指导病毒复制;三是改造腺病毒纤毛蛋白,使其特异地感染肿瘤细胞并在其中复制.在第二种策略中,Paul等将Ad5的E1区置于AFP启动子之下,从而构建了靶向肝细胞癌的选择复制性腺病毒AvElaO4i,Ron等将构建的PSA特异的增强子启动子序列直接替换E1A的调控序列,从而构建了靶向前列腺癌的选择复制性腺病毒CN706.基于该研究室的条件和基础,我们拟采用第二种策略,以人黑色素瘤为靶标,对腺病毒介导癌细胞裂解疗法展开实验研究.我们以PCR克隆的方法,获得了AdE1基因区,鼠酪氨酸酶基因的启动子和增强子序列,经过一系列DNA重组,构建了pAC-AdE1、pAdE1-IRES1.neo、pAdhepE1等载体;pAdhepE1与pJM17共转染293细胞,经同源重组,获得靶向人黑色素瘤的选择复制性腺病毒AdhepE1;在体外验证了AdE1的功能及重组腺病毒AdhepE1的靶向性,为该基因治疗方案的深入研究打下了基础.