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目的:通过建立蓝光照射负载A2E的人RPE细胞光损伤模型,探索在此过程中A2E与蓝光对人RPE细胞内溶酶体及线粒体摄取、释放Ca2+的影响。方法:原代培养人RPE细胞,将传代至第四至第六代的细胞用于实验。同一个体的同一代细胞用于相同的检测指标,将细胞随机分为五组:对照组、蓝光光照组、蓝光光照+硝苯地平组、负载A2E+蓝光光照组、负载A2E+蓝光光照+硝苯地平组;蓝光光照强度(2000±500)Lux,时间6小时,光照结束后继续培养24小时;光照前2小时加入终浓度为25 μM的A2E;光照前1小时加入终浓度为10-4M的硝苯地平。(1)使用CaTM-2AM结合胞浆内的钙离子,激光扫描共聚焦显微镜观察每组RPE细胞的荧光变化并拍照,并通过软件分析荧光强度(2)使用Rhod-2 AM结合线粒体内的钙离子,激光扫描共聚焦显微镜观察各组线粒体钙离子荧光情况并拍照,分析荧光强度(3)使用LysoTracker Red DND-99标记人RPE细胞酸性溶酶体,Fluo-3 AM结合细胞内的钙离子,激光扫描共聚焦显微镜观察并拍照,二者共定位后分析溶酶体内钙离子荧光强度(4)将细胞分为四组:对照组、蓝光光照组、负载A2E组、负载A2E+蓝光光照组,用JC-1法检测线粒体膜电位变化情况。结果:(1)激光扫描共聚焦显微镜检测各组人RPE细胞胞浆内的钙离子荧光强度发现:蓝光光照组、蓝光光照+硝苯地平组、负载A2E+蓝光光照组、负载A2E+蓝光光照+硝苯地平组内钙离子荧光强度均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);蓝光光照+硝苯地平组内荧光强度低于蓝光光照组(P<0.05),负载A2E+蓝光光照组、负载A2E+蓝光光照+硝苯地平组高于蓝光光照组(P<0.05);负载A2E+蓝光光照组、负载A2E+蓝光光照+硝苯地平组高于蓝光光照+硝苯地平组,差异均有统计学意义(P<0.05);负载A2E+蓝光光照组荧光强度高于负载A2E+蓝光光照+硝苯地平组(P<0.05)。(2)激光扫描共聚焦显微镜检测各组人RPE细胞线粒体内的钙离子荧光强度发现:蓝光光照组、蓝光光照+硝苯地平组内钙离子荧光强度高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05),负载A2E+蓝光光照组、负载A2E+蓝光光照+硝苯地平组均低于对照组(P<0.05);蓝光光照+硝苯地平组、负载A2E+蓝光光照组、负载A2E+蓝光光照+硝苯地平组内荧光强度均低于蓝光光照组(P<0.05);负载A2E+蓝光光照组、负载A2E+蓝光光照+硝苯地平组均低于蓝光光照+硝苯地平组(P<0.05);负载A2E+蓝光光照组荧光强度低于负载A2E+蓝光光照+硝苯地平组(P<0.05)。(3)激光扫描共聚焦显微镜检测各组人RPE细胞溶酶体内的钙离子荧光强度发现:蓝光光照组、蓝光光照+硝苯地平组内钙离子荧光强度高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05),负载A2E+蓝光光照组、负载A2E+蓝光光照+硝苯地平组均低于对照组(P<0.05);蓝光光照+硝苯地平组、负载A2E+蓝光光照组、负载A2E+蓝光光照+硝苯地平组内荧光强度均低于蓝光光照组(P<0.05);负载A2E+蓝光光照组、负载A2E+蓝光光照+硝苯地平组均低于蓝光光照+硝苯地平组(P<0.05);负载A2E+蓝光光照组荧光强度低于负载A2E+蓝光光照+硝苯地平组(P<0.05)。(4)流式细胞法检测各组人RPE细胞线粒体膜电位水平,膜电位去极化程度越大,对应线粒体膜电位水平越低,因此发现对照组膜电位水平高于蓝光光照组、负载A2E组及负载A2E+蓝光光照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);负载A2E组内线粒体膜电位水平高于蓝光光照组(P<0.05),蓝光光照组、负载A2E组均高于负载A2E+蓝光光照组(P<0.05)。结论:(1)蓝光光照可导致RPE细胞胞浆、溶酶体及线粒体内Ca2+浓度升高,不影响溶酶体及线粒体摄取Ca2+功能。(2)A2E通过损伤溶酶体及线粒体膜致二者释放Ca2+进入胞浆。(3)蓝光光照、A2E负载均可使线粒体膜电位降低,且二者具有协同作用。