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目的:利用多位点Gateway克隆技术构建过表达STOP基因(Stable Tubule Only Polypeptide,STOP)慢病毒载体及无外源基因对照慢病毒载体。建立一种操作简单易存活且纯度较高的BTBR小鼠皮层神经元培养方法。为后续进一步探讨STOP蛋白改善BTBR小鼠孤独症样行为的可能作用机理,及其在孤独症的临床治疗应用中提供理论和实验依据。方法:1.利用多位点Gateway克隆技术构建表达载体pLV[Exp]-mCherry:T2A:Puro-EF1A>STOP,再将成功构建的表达载体与辅助质粒共转染293T细胞进行病毒包装。测定病毒滴度并通过转染293T细胞在荧光显微镜下观察荧光表达情况来进行鉴定。利用同样的方法构建无外源基因对照慢病毒载体。2.利用BTBR孕鼠的胎鼠作为实验对象,取出双侧脑皮质,彻底剥离脑膜组织,充分剪碎消化,接种于预先处理过的多聚赖氨酸包被后的6孔板中,并对不同培养时间段的神经元进行形态学观察。结果:1.通过基因测序证实成功构建pLV[Exp]-mCherry:T2A:Puro-EF1A>STOP慢病毒载体。并且包装出具有高效感染力的慢病毒,滴度大约为5×10~7 TU/mL。转染293T细胞后可见明显的红色荧光表达。利用同样方法构建出无外源基因对照pLV[Exp]-CMV>mCherry(ns):T2A:Puro慢病毒载体。2.利用此方法成功培养出纯度高且生长良好的BTBR小鼠皮层神经元,并且神经元的形态学特征在不同生长阶段都比较典型。结论:1.成功构建STOP基因慢病毒表达载体及无外源基因对照慢病毒载体。2.分离培养获得纯度较高的BTBR小鼠皮层神经元。