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背景:食管癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,食管癌在我国发病率有明显的地区差异,其发病率及死亡率均居高不下。食管癌在我国以鳞状细胞癌常见,其具体发病原因及机制仍然不得而知。肿瘤微环境在肿瘤的发生发展中起着不可或缺的作用,而肿瘤坏死因子α(TNF-α)是肿瘤微环境中一个重要的炎症因子,其可促进乳腺癌,结肠癌,膀胱癌等肿瘤的发生发展。TNF-α在食管鳞癌微环境中对食管鳞癌的具体作用的研究还未见报道,因此,我们对TNF-α下游基因肿瘤坏死因子α诱导蛋白2基因(TNFAIP2)在食管鳞癌中的表达情况进行检测、研究。可望为食管癌基因治疗方面提供可选的靶点,为食管癌的临床治疗提供理论基础与新的治疗方式。方法:1.采用qRT-PCR及免疫组化技术分别检测癌及癌旁组织中TNFAIP2在基因和蛋白层面的表达水平。2.采用qRT-PCR筛选高表达靶基因的食管鳞癌细胞株,选择两株高表达靶基因的细胞株,通过上海吉凯基因科技有限公司在选定的两株细胞株中构建低表达靶基因的sh RNA慢病毒载体。实验分组慢病毒介导RNA干扰组(LV-RNAi),空载体组(LV-CON)。3.采用qRT-PCR和Western blot技术验证靶基因在基因及蛋白层面的干扰效率。4.采用重组人肿瘤坏死因子α(r TNF-α)药物作用于选定的细胞株48小时,运用q RT-PCR及Western blot技术检测靶基因的基因及蛋白表达水平。5.运用克隆形成及CCK8方法检测各组细胞的增殖能力。6.细胞周期。凋亡检测(流式)。7.细胞迁移及侵袭能力检测(Transwell小室法)。8.肿瘤细胞增殖、周期、迁移,侵袭相关蛋白表达水平检测(Western blot)。9.SPSS22.0进行统计学分析。结果:1.TNFAIP2在食管鳞癌及癌旁组织中,分别在基因及蛋白水平存在表达差异,且在癌组织中为高表达。2.选定细胞株在基因及蛋白水平的干扰效率超过75%。3.采用rTNF-α作用后,靶基因及蛋白水平均表达增高。4.克隆形成和CCK8结果提示:LV-RNAi组较LV-CON组能抑制细胞增殖;细胞周期、凋亡结果提示:LV-RNAi组较LV-CON组,明显抑制细胞处于G0/G1期,但对细胞凋亡无影响;迁移、侵袭结果显示:干扰组较对照组能抑制癌细胞的迁移。侵袭能力。5.检测到Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白在LV-RNAi组较LV-CON组表达降低或增高。结论:本实验首次证实TNFAIP2在食管鳞癌中呈高表达状态,并证实r TNF-α细胞因子可促进食管鳞癌细胞株在基因及蛋白水平高表达靶基因及产物。通过慢病毒介导的RNA干扰技术,证实低表达TNFAIP2对食管鳞癌细胞株的生物学功能产生明显影响:抑制肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭。对于TNFAIP2对食管鳞癌的发生、发展及生物学功能影响的进一步探究,得出TNFAIP2可能通过Wnt通路发挥作用,并且可能为试管鳞癌的一个原癌基因靶点。