【摘 要】
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目的:选择3-4周龄的野生型C57BL/6J小鼠为本课题研究模型,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立Gata4基因H435Y突变型小鼠。方法:针对Gata4基因的基因序列信息设计针对Gata4基因H435Y位点的单链向导RNA(single-guide RNA,sg RNA),经活性检测后,将具有活性的sg RNA和Cas9体外转录成RNA,通过显微注射将sg RNA、Cas9 m RNA
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目的:选择3-4周龄的野生型C57BL/6J小鼠为本课题研究模型,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立Gata4基因H435Y突变型小鼠。方法:针对Gata4基因的基因序列信息设计针对Gata4基因H435Y位点的单链向导RNA(single-guide RNA,sg RNA),经活性检测后,将具有活性的sg RNA和Cas9体外转录成RNA,通过显微注射将sg RNA、Cas9 m RNA以及含有点突变序列的donor DNA片段注射到小鼠受精卵中,通过PCR和基因测序方法对Gata4基因突变进行检测及鉴定,培育Gata4基因突变小鼠并分析后代的突变情况。结果:顺利构建sg RNA载体并体外转录,成功sg RNA、Cas9 m RNA以及含有点突变序列的donor DNA片段注射到受精卵中。基因测序鉴定获得4只F0代初建鼠。选取阳性F0代小鼠与野生型C57BL/6J小鼠杂交,得到F1代鼠,再相互交配获得F2代鼠。PCR显示F2代鼠Gata4基因H435Y突变,成功建立Gata4基因H435Y突变小鼠模型并传代繁育。结论:通过CRISPR/Cas9技术可以成功建立Gata4基因H435Y突变小鼠动物模型。
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