【摘 要】
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肽库的传统建立方法为噬菌体展示技术,这种技术无法将肽库内每个多肽片段单独表达出来并在功能上和结构上加以筛选比较,在大规模应用和比较中无法实现肽库的更多价值,本研究
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肽库的传统建立方法为噬菌体展示技术,这种技术无法将肽库内每个多肽片段单独表达出来并在功能上和结构上加以筛选比较,在大规模应用和比较中无法实现肽库的更多价值,本研究拟利用基因工程的方法建立一种与噬菌体展示技术不同的肽库。在设计随机十五多肽序列后,将多肽序列重组到载体pGEX4T-1中,然后转化重组质粒到E.coli DH5a感受态细胞内,得到的肽库容量在2.5×10~4左右。我们随机挑取有外源插入的一百个重组质粒,转化到E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,以IPTG诱导表达重组蛋白,用SDS-PAGE方法检测多肽表达效率,将有表达的重组蛋白以溶菌酶进行裂解,以SDS-PAGE检测重组蛋白表达方式,取在上清表达的36个重组蛋白利用免疫亲和层析技术以Glutathione Sepharose4B将重组蛋白纯化并利用BSA为参照标准粗定量其浓度,以MTT方法检测其对肿瘤细胞HeLa生长活性的影响,结果显示所纯化的大部分重组蛋白对HeLa肿瘤细胞的生长具有一定的抑制作用。本研究表明利用基因工程方法建立随机15肽库是完全可行的,并对以后多肽的功能研究奠定了良好的基础。
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