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近年来,乳腺癌的发病率持续上升,乳腺癌的综合治疗中,化疗是不可或缺的,具有十分重要的作用,但是有些化疗效果不是很理想,而且容易产生耐药性。在肿瘤生长过程中,其内部新生血管的形成,对肿瘤侵袭性生长和转移等过程中具有推动作用。目前研究发现,肿瘤新生血管的形成包括两个机制,一种是依赖内皮细胞,包含血管生成和血管形成,另一种是不依赖内皮细胞的拟态血管生成(Vasculogenic mimicry,VM),即非血管化营养通路。作为内源性血管生成抑制剂的血管内皮抑素(Endostatin),对血管内皮细胞的作用具有特异性,在抑制其生长和迁移过程中有重要作用,并且对其凋亡还具有诱导作用,这两方面对血管形成具有明显的抑制作用,从而抑制肿瘤生长。近些年也有部分学者发现,血管内皮抑素可以不通过血管,直接对肿瘤细胞生长产生抑制作用,并且对肿瘤细胞凋亡也起到诱导作用,但是其具体作用机制尚不十分清楚。目的:观察血管内皮抑素与紫杉醇在抑制乳腺癌SK-BR-3细胞生长过程中的作用,探讨血管内皮抑素与乳腺癌细胞凋亡的关系,研究其是否能够诱导癌细胞凋亡;观察血管内皮抑素与紫杉醇对乳腺癌细胞中VEGF表达的抑制作用;观察血管内皮抑素与紫杉醇联合应用,分析二者之间是否具有相互作用,若是有,则对二者的联合用药时间及剂量关系进行研究并探讨可能的相关机制,对指导临床联合用药提供理论依据。方法:1 MTT检测化疗药物对乳腺癌SK-BR-3细胞的抑制率;2 Western-blot法检测血管内皮抑素与紫杉醇对SK-BR-3细胞VEGF表达的影响;3免疫细胞化学法观察不同药物方案对SK-BR-3细胞VEGF表达的影响;4细胞凋亡率的检测应用流式细胞仪;5 Real time PCR法观察凋亡相关蛋白的表达。结果:1紫杉醇在发挥抑制乳腺癌SK-BR-3细胞的作用时对时间和剂量具有明显依赖性,实验结果表明,对SK-BR-3细胞应用紫杉醇24h后的IC50为1.08μg/ml;应用浓度为1μg/ml,24h后细胞抑制率为33.9%,凋亡率为12.4%。在紫杉醇1μg/ml作用乳腺癌SK-BR-3细胞24h后可发现Bcl-2的表达下调,而Bax则轻微升高的表达。2血管内皮抑素在发挥抑制乳腺癌SK-BR-3细胞的作用时对用药时间具有明显的依赖性,但对用药剂量无依赖性。应用血管内皮抑素1μg/ml 48h后的细胞抑制率为33.7%,凋亡率为11.6%;血管内皮抑素1μg/ml作用48h可见Bcl-2的下调,而Bax的表达无明显改变。3 Western-blot法结果显示,血管内皮抑素与紫杉醇均能下调SK-BR-3细胞VEGF的表达,而紫杉醇下调VEGF的表达作用较为明显(P<0.05)。免疫细胞化学结果显示,药物起效后,SK-BR-3细胞形态与密度发生变化、给药作用最强的同时VEGF的表达与对照组相比则减弱。4紫杉醇与血管内皮抑素联合应用时,二者具有明显的协同作用;而序贯给药较紫杉醇单独应用细胞抑制率无明显变化;二者联合应用且同时给药对SK-BR-3细胞凋亡的诱导作用最强,同时对Bcl-2的表达下调作用明显增加。结论:血管内皮抑素与紫杉醇均对乳腺癌SK-BR-3细胞的生长具有抑制作用,且对细胞凋亡有诱导作用。二者联合应用且同时给药产生的效果最佳,其协同作用可能与诱导细胞凋亡和减少VEGF的有效表达有关。