【摘 要】
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目的:合成载bFGF壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶,研究其对大鼠骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化作用,为其在修复牙槽骨缺损的临床应用提供细胞水平的实验依据。方法:制备壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶,冻干后电子显微镜下观察其表征。将水凝胶浸泡于模拟体液中用于水凝胶体外降解能力的测定。分离并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞,与水凝胶共培养,活/死细胞染色检测水凝胶毒性。bFGF载入水凝胶中,CC
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目的:合成载bFGF壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶,研究其对大鼠骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化作用,为其在修复牙槽骨缺损的临床应用提供细胞水平的实验依据。方法:制备壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶,冻干后电子显微镜下观察其表征。将水凝胶浸泡于模拟体液中用于水凝胶体外降解能力的测定。分离并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞,与水凝胶共培养,活/死细胞染色检测水凝胶毒性。bFGF载入水凝胶中,CCK-8法筛选出载bFGF温敏水凝胶促大鼠骨髓间充质干细胞增殖的相对最适浓度并用于后续研究。后续实验分为空白对照组、单纯温敏水凝胶组、载bFGF温敏水凝胶组,碱性磷酸酶染色、茜素红染色及钙结节半定量分析观察载bFGF温敏水凝胶对大鼠骨髓间充质干细胞成骨向分化能力的作用。实时荧光定量PCR检测载bFGF温敏水凝胶对大鼠骨髓间充质干细胞成骨相关基因m RNA表达的影响。结果:1.壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶具有良好的温敏性、生物降解性、生物相容性,冻干后的水凝胶疏松多孔,扫描电镜显示其孔径在20-80μm之间。2.成功分离出大鼠骨髓间充质干细胞,载bFGF温敏水凝胶能显著促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖,并呈剂量依赖性,相对最适浓度为100ng/ml。3.碱性磷酸酶染色结果显示载bFGF温敏水凝胶组碱性磷酸酶表达增多,并随着成骨诱导天数增加表达增强,载bFGF温敏水凝胶组碱性磷酸酶染色程度高于空白对照组与单纯温敏水凝胶组。茜素红染色及钙结节半定量分析结果显示载bFGF温敏水凝胶组钙结节形成增多,并多于空白对照组与单纯温敏水凝胶组。4.qRT-PCR结果显示载bFGF温敏水凝胶组ALP、BMP-2、Runx2 m RNA表达量均高于单纯温敏水凝胶组和空白对照组,单纯温敏水凝胶组对应成骨基因表达高于空白对照组。结论:1.成功制备壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶,具有良好的温敏性、生物降解性、生物相容性。2.载bFGF温敏水凝胶能显著促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖,促增殖能力在一定范围内与bFGF浓度呈正相关,载bFGF温敏水凝胶促增殖相对最适浓度为100ng/ml。3.载bFGF温敏水凝胶能促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化,并能使大鼠骨髓间充质干细胞成骨相关基因ALP、BMP-2、Runx2m RNA表达增高。
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